小中大【求助】关于蛋白诱导表达的问题
各位朋友:
我最近在做白细胞介素-7的诱导表达时,遇到一些问题亟需各位高手相助!
下面是我的实验条件:(宿主菌是BL21,目的蛋白2万左右)
1、 取重组菌的种子50ul转接至5ml LB中37℃过夜培养。
2、按4∶100比例稀释过夜菌,一般将2ml菌加入到含50mlLB培养基(含0.2%葡萄糖)的500ml培养瓶中, 37℃震荡培养2小时;
3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度1.0mM作为实验组,继续于30℃、200rpm震荡培养7hr,每个小时取样一次;
4、分别取菌体1ml,4℃离心12000g×1min收获沉淀(收获全菌);
5、用100ul SDS凝胶加样缓冲液重悬菌体,100℃水浴5分钟,离心12000g×1min,取上清液20ul 上样做SDS-PAGE等分析;
问题是:跑完电泳,用考马斯亮蓝染色后,脱色,在胶上没办法看到诱导成功的条带,只有菌体浓度的变化? 请各位高手给小弟分析分析,多谢了!