生物制药

请教各位一个关于重组蛋白质药物问题：
现在手上有一个重组蛋白质药物，由于大部分蛋白质都具有结合各种小分子的能力（尤其是疏水分子，如脂肪酸等），因此要求鉴定其结合的分子是什么，做了一个有机提取，然后用HPLC分析，出现四个主峰，与标准脂肪酸对比，发现前两个主峰分别为棕榈酸和油酸，末尾出现的两个峰与各种标准物都不相符合，判断其不是脂肪酸，想鉴定这两个组分到底是什么物质，请问有什么方法可以完成，不胜感激！

看了一些论坛上说的一些方法，给我的印象貌似GC-MS可以完成，但是GC-MS要求成分能够气化，再就是LC-MS，LC-MS得到的信息应该是和GC-MS的信息一样，其次是NMR，IR，UV-Vis表征是，NMR，IR,UV-VIS表征的话是否能够直接鉴定混合物，还是要得到纯的样品，若要得到纯的样品似乎就比较难了
请大家给给建议，非常感谢~！

感觉不能，因为GCMS有一个标准谱库对照能知道未知物是什么（如果不是包涵在标准谱库之内也不好判断），LCMS必须要有标准物质本身才能确定，没有标准物无法知道它是什么。

楼主可以先上质谱试试 看看分子量多大 再看一下碎片离子大都是什么样的
然后走一下红外应该可以大概确定一下结构

谢谢，那看来这还是个蛮难的而难题啊，我觉得是不是应该先上一下GC-MS，看看标准库里面有没有我的物质，如果没有再想其他办法

谢谢，如果上红外的话，我的样品本来就很少，也不知道这个对纯度要求有多高，可以做NMR么？

如果分析主峰离得不是很近的话，可以在分析的时候在出液口接峰，然后通过MS验证，通过比对可以确定分子量，然后确定的主要物质的吧。我们以前做肽，有时候就是这样。不知对你有没用

分离出单一化合物，进行NMR 碳谱和氢谱测定才是最有希望的。

楼主，上GCMS没错，看分子离子峰是多少，通过精确分子量就可以推出可能的元素组成（化学式），然后再计算不饱和度，再解析碎片的元素组成并判断可能解构，最后综合推出未知物的所有可能结构。然后做GC-FRIR通过红外光谱再确认一下你的推断，另外，如果结构中有胺基等碱性基团，可做LCMS再验证一下。

题目和问题好像不太一致。
你说检测的化合物与脂肪酸标准品的出峰时间一致，认为是脂肪酸。
但若是结合在蛋白质上的脂肪酸与标准品的脂肪酸出峰时间应该不一致。
鉴定蛋白质上结合了何种小分子化合物实际很困难。
因为是什么蛋白质你清楚吗，那些蛋白质结合了小分子化合物清楚吗？
若这些都不清楚你如何分离、提纯、鉴定呢？

若要鉴定脂肪酸用GC-MS比较好，要衍生化。
因为GC-MS都带有NIST谱库，常见脂肪酸的谱图都有。
所以，可以根据谱图进行比对。
另外脂肪酸的出峰也有规律，
C数越多保留时间越大，
相同C数不饱和键越多保留时间越大。
根据这些基本上可以推算出大概是什么脂肪酸。

多谢各位热心人士的宝贵意见，看来GC-MS还是首选了，要先试试看了
另外回答一下fsciq的疑问，现在手头上是已经纯化过的蛋白质，纯度>99%吧，该蛋白质的性质都很清楚，它可以结合各种疏水的分子，因此工艺过程和宿主都可能引入，尽管做了纯化，但是也不能百分之百保证蛋白上面没有结合任何东西，这些东西肯能对人体有害。
我们是按照文献用有机溶液提取，蛋白在有机溶液中肯定是变性沉淀了，离心取上清，此时结合在上面的小分子已经解脱下来成为游离的小分子，然后才进的分析柱进行分析，而不是说用蛋白和脂肪酸一起进柱子，可能是我没有说清楚，呵呵，thanks
基本程序是有机溶剂提取，沉淀，离心，取上清，上柱分析，与标准品对照，希望大家遇到这个问题的时候可以借鉴。