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标题:【求助】聚丙烯酰胺电泳中一个奇怪的问题

gmjghh[使用道具]
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发表于 2014-5-29 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】聚丙烯酰胺电泳中一个奇怪的问题


向各位大虾求助：最近跑PAGE 的时候，莫名其妙的前沿指示剂在浓缩胶中消失了，很奇怪，今天又是如此，所用药品全是原来用过的没有换，是怎么回事呢？烦指教
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-5-29 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 gmjghh 于 2014-5-29 10:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

向各位大虾求助：最近跑PAGE 的时候，莫名其妙的前沿指示剂在浓缩胶中消失了，很奇怪，今天又是如此，所用药品全是原来用过的没有换，是怎么回事呢？烦指教 ...

这个问题我也曾经碰到过。
在论坛搜索了一下，我发现，很多跑胶的朋友怕都遇到过类似的问题。
以前我没去纠缠这个现象，其实还是有点颜色的，只是偏黄，反正让它跑到底就行了。
今天看到这个求助，我突然意识到：
前沿指示剂就是溴酚蓝，而这些化学指示剂是根据 pH 值，有一定的显色范围的。
溴酚蓝的显色范围是：3.0（黄）-4.2（紫），>4.2都是紫色。
根据这个思路的指导，前沿指示剂在浓缩胶中消失，只会是胶的酸度及电极缓冲液的pH 值有问题了。建议：pH值对跑PAGE很重要，一定要保证浓缩胶、分离胶、电泳缓冲液的pH都准确！
给一个链接：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/6039027_0.html')
或者自己在园子里搜索一下。

[ 本帖最后由 remenb 于 2014-5-29 10:34 编辑 ]
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2014-5-29 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 remenb 的帖子

我找到原因了，用ph计测定了电极缓冲液的，果真有问题，唉！小师妹配缓冲液的时候将tris 和Gly的量弄翻了，ph居然接近4了，听君一席话，深感理论基础的匮乏啊！由衷的感到解决问题要有的放矢！多谢多谢
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remenb[使用道具]
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发表于 2014-5-29 10:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

正常，呵呵，其实我的理论也不怎么样。你们一般都是学生物的，学基础的时候可能没注意，就记不住，而我是学化学出身的，改行做了生化，对指示剂等是我们的必修课，记不住也不行啊，呵呵。
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发表于 2014-5-29 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵 我也学到了不少啊 虽然我没碰到这种情况 多谢了 望我们能多多交流!!!
在这说说我碰到的情况,望能帮忙解答:
跑胶时前沿指示剂总是带一节黄色带,后面拖的还是蓝色的,是什么回事呢?
如果是ph值不准,应该都变黄或都紫色才对啊???
先谢谢了!!!
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发表于 2014-5-29 10:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

前沿指示剂在浓缩胶中消失，可能是胶的酸度及电极缓冲液的pH 值有问题了。因为pH值对跑PAGE很重要，一定要保证浓缩胶、分离胶、电泳缓冲液的pH都准确！还有我看过不同的资料上给的Loanding buffer 配法不同，一定要注意。我常用5XLoanding buffer ，从没遇到过这类问题。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-5-29 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

"跑胶时前沿指示剂总是带一节黄色带,后面拖的还是蓝色的,是什么回事呢?"
那是样品pH偏低,电泳buffer是正常的，电泳时样品pH逐渐被电泳buffer缓冲过来了，所以尾部会变蓝，等你继续跑胶,都会变蓝了
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ero11[使用道具]
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发表于 2014-5-29 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一定要保证浓缩胶、分离胶、电泳缓冲液的pH都准确
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