【求助】western检测核因子NF-κB

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标题:【求助】western检测核因子NF-κB

hyuu[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

快要开始实验了,打算从组织中提取蛋白测NF-κB活化情况.
现在不明白的是,一定得提核蛋白吗?总蛋白可以反映活化情况吗?
老板给的经费实在有限啊.提胞浆胞核蛋白试剂盒贵哦.
搜了园子里的配方帖子看了,可每种用量都提示不清啊.
大家出出注意帮帮我啊,先谢谢了

nn255[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你要是检测活化的NFKB, 那就必须抽提核蛋白,因为NFKB活化后就会解离IKB,然后剩下的复合体就会识别核膜上的蛋白入核,,入核后结合到DNA上参与基因的调控表达! 你检测的就是在入核后的部分,我看你有必要做EMSA实验!
另外,还不知道你做的是什么组织!

hyuu[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我要做的人胎盘组织啊.
实验市条件不行,老板也没有多少钱.估计EMSA做不起来啊.
提核蛋白买试剂盒很贵吧?
看了园里好多自己配的,可我还是搞不清,一头雾水哦
帮帮我吧

wawa[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最好买核蛋白提取试剂盒，自己配的风险太大

做western一定要舍得花钱，不然够你折磨的

bluelake[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其实WB,emsa实验都比较难做,如果你的样品比较少还好办,要是多的话就更费钱了,但是一般实验有着两个实验参数的话分量会比较重,
另外,核蛋白抽提试剂盒倒不是很贵,400差不多肯定搞定,EMSA的话如果你没做过,最好让人家带做,花费也不是很贵,WB的话,买抗体自己做成本比较底,可以试一试,主要也就是买抗体比较花钱啦!
另外,你要是做EMSA我可以帮你搞定,我这里有份说明书,试了两次没传上去,你还是给我邮箱,我给你传过去吧

youyou99[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得你还是最好做EMSA，因为你要证明的得是活化得NF-KB，EMSA既可以证明活化得量得多少，而且证明是和相关DNA得结合，而WESTEN仅证明量得多少，若量少得话，可能作不出来。

hyuu[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

EMSA比起western是不是更难做些啊.一直在临床上,也没做过实验哦.
还有就是银子有限啊.
EMSA需要什么特殊仪器啊,之前我们这的实验室都没人做过:{

00无名指00[使用道具]
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