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标题:【求助】双向第二向时间过长

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发表于 2014-5-29 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】双向第二向时间过长


双向的二向，原来时间约为3－4h,后增加为6－7h,最近一次10h居然只跑了一半，体系未变，请问可能是什么原因
体系： 缓冲液：25m mol/LTris，192m mol/L 甘氨酸及0.1% SDS
电流： 恒流 20mA/板
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发表于 2014-5-29 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第二向是什么系统，是不是上下槽露液。下次注意一下电泳参数（电压。电流）
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c86v[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

换新缓冲液试一下，可能是时间长了其离子浓度有变化，或者是那里接触不良，或者看一下胶下面是不是完全接触缓冲液，有没有气泡阻碍电流，我们一般是先80v5分钟 ，然后是120v 大约2－3小时，祝你好运
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发表于 2014-5-29 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢。我再试试
缓冲液大家有测ph值吗？一般是多少？
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发表于 2014-5-29 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
好像是8.多，多多少不记得了，可能是8.6左右
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发表于 2014-5-29 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得挺正常，我二向用的是Bio-Rad 的PROTEIN Ⅱxi ，恒流 20mA/板，我也是跑10小时左右每次。
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发表于 2014-5-29 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你们做的是7CM 的小胶的二向吧?我用PHARMACIA二向电泳系统跑24CM要大概16-18个小时才能下来!
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我跑的二向也要8-9个小时,应该没问题
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的胶是多大的？
我做的24cm胶每胶 0.2w 1h
0.4w 1h
17w 6h
电泳槽漏液也会跑的慢
还有可能是缓冲液太脏吧，可以过滤缓冲液，用的时间不要太长。
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莲花白[使用道具]
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发表于 2014-5-29 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

二向时间过长极有可能是电泳缓冲液的问题。电泳缓冲液在电泳后都会有消耗，所以，上槽液每次都要换新的，下槽的可用2～3次。当然，一定要避免上槽漏液。
缓冲液按照配方配制好后，不用测ph值。一般是 ph8.3。
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