【求助】蛋白质浓度测定

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标题:【求助】蛋白质浓度测定

8princess8[使用道具]
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发表于 2014-5-31 09:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

本人在蛋白质技术方面是初学者,希望得到高人指点.
我是购买的考马斯亮蓝试剂盒测蛋白浓度,但是每次测得的浓度相当小,几乎叫没有,此蛋白是经过层析纯化后又浓缩得到的,检测其有容血活性又比较强,说明蛋白是存在的,但为什么用试剂盒又测不出呢?

one[使用道具]
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发表于 2014-5-31 09:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的蛋白分子量多大？小于40AA的小肽不能与考马斯亮蓝结合。

biabiade[使用道具]
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发表于 2014-5-31 09:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

本人也碰到过这样的问题，小肽用考马斯亮蓝试剂盒测定效果不好。建议采用lowry法，用微孔板，效果不错。买个乙试剂就可以，甲试剂自己配制。

莲花白[使用道具]
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发表于 2014-5-31 09:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以试一下Lorry法，还有BCA试剂盒，为改良的lorry法，均可以进行蛋白质浓度的测定。

ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-5-31 09:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如何确定我的蛋白质的分子量大小呢?我也是新手,准备做蛋白质,望高人详细指点一点,最好是能给我一个具体的测定操作顺序,谢谢

8princess8[使用道具]
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发表于 2014-5-31 09:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

40AA中AA是什么意思?是氨基酸我就不知道我的有多少AA了,大概做了个SDS-PAGE,分子量为35道尔顿,请问这个分子量用什么方法测蛋白质浓度?

66+77[使用道具]
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发表于 2014-5-31 09:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #6 8princess8 的帖子

AA指amino acid，氨基酸的意思

66+77[使用道具]
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发表于 2014-5-31 09:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以用不同的方法试试看，还有，应该是35kDa吧？

vivian4123[使用道具]
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发表于 2014-5-31 09:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

OD280或OD220测浓度