小中大【求助】做WB遇见特奇怪的难题！
我做WB快两年了，以前一直都很好，跑出来的条带都很亲清晰，不过最近的结果太差了，找了好久的原因也没找到，请有经验的不吝赐教：
我以前用的是25mM Tris,192mM glycine,20%甲醇，100V转膜80分钟，一直结果都不错，87KD的蛋白Marker很清晰
可是最近突然就不清晰了，而且是高分子量的和低分子量的同时不清晰（甚至没有条带）；
我换了电转槽，还是不行，后来我改成横流90mA分别跑了3个小时和5个小时，结果小分子量的还可以，87KD的和以前相比差很多，而且3个小时和5个小时的结果没有太大的差别，应该不是时间不够；
我又跑了140mA的条件，结果没有什么改变，还是不行；
后来我改用48mM Tris,39mM glycine,20%甲醇试了不同的电流和时间，87KD的效果还是和以前相差很多；
附：前段时间出现过一次这样的事情，因为原来用的是25mM Tris,192mM glycine,10%的甲醇，后来把甲醇的含量提高到20％后结果明显变好了，可是刚过一个月又不行了，还是高低分子量都不好。
问题是：到底是哪里出了错呢？做了好几年了，为什么现在就不行了呢，以前一直都很好啊。
请大家不吝赐教！多谢！
