液相色谱

我用的Grace Apollo的C18（5µ）柱，有一段时间了，最近发现它用的时间稍长，进样较多的时候，样品的峰行就会开叉等现象出现，不规则。
所以我想再生下，但是不知道用哪些流动相，什么顺序？
不知道有没有一些官方的参考！最好。
请各位大侠指点，，感激不尽！

GRACE 的柱子我用了很多，但是大部分都是ALLTIMA，效果比较好~
APOLLO用过一根，不是很有心得，但是ALLTIMA的柱子是可以反冲甚至反着用的，效果特别好哦~~一般就用100%水先冲洗，小流量，时间长点，然后换由100%有机相冲洗，只是使用中一定要多冲下，1ml/min半小时肯定是不够的，最多一个月就柱压上升。不知道APOLLO的柱子是不是也可以这样反冲下？

这是我收集的一些关于再生的，你可以参考下：

色谱柱在使用一段时间后柱效会下降，这时可以考虑对色谱柱进行再生。进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。

再生处理包括活化(右→左) 和净化(左→右) 两种。
请根据下表选择您的再生方法：

极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生：
正庚烷←→氯仿←→乙酸乙酯←→丙酮←→乙醇←→水**

非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：
水←→乙腈←→氯仿（或异丙醇）←→乙腈←→水

再生之前先确认一下使色谱柱失效的主要原因是什么，有针对性的再生。
如果是强保留物质则用甲醇、四氢呋喃、氯仿、异丙醇、正己烷、异丙醇、氯仿、四氢呋喃、甲醇的顺序各冲洗45min。
如果是蛋白质累积造成的，则用乙腈：水：三氟乙酸＝50：50：0.1％冲洗色谱柱60min；

对于典型的硅胶基质键合反相柱，在未使用缓冲溶液的条件下，推荐使用以下清洗溶剂系列：
      100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷
用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。最后用10柱体积的异丙醇过渡，然后回到原来的流动相体系（但不含缓冲盐），最后回复到起始流动相配置。四氢呋喃也是另外一种常用的清洗溶剂。如果怀疑柱子被严重污染，还可用二甲亚砜（DMSO）或 二甲基甲酰铵和水按50：50的比例混合，以低于0.5ml/min的流速冲洗色谱柱。


两种再生法:1.甲醇:水=90:10-甲醇-二氯甲烷-甲醇-甲醇:水=90:10依次冲洗.
2.水—乙腈—氯仿（或异丙醇）—乙腈—水依次冲洗.这两个方法选一种也可以。

是不是由于你的样品保留比较强造成的呢？你先考虑一下这个问题，再考虑再生，也不迟。

楼主，再生有风险，操作须谨慎~

柱子不行了，要换新柱子了

最好是询问供应商

用异丙醇冲一下柱子，应该是柱头脏了，压力正常不？

进样量太大就是会分叉啊，降低进样量。

进样量再大也不会分叉的，只可能是平头峰，前延或者拖尾，分叉肯定是有脏东西，或者柱头塌陷

你用这个柱子测试什么样品了啊，流动相是什么，一般色谱柱如果不太好了，你先用5%的甲醇水溶液冲洗，再用纯甲醇溶液冲洗，可以改善峰型。