小中大【求助】GST融合蛋白纯化出现杂带目的带,求高手指点
本人利用PGEX3X的载体表达GST融合蛋白,蛋白大小据推测应在80-90KD之间.表达蛋白通过谷胱甘肽柱子纯化,发现虽然在推测位置有一条带,但纯化出的大量蛋白在60KD左右.
而且对比诱导前后的表达图谱,发现诱导后出85KD部位多出一条带,60KD附近的蛋白表达也明显增加,表明60KD的这些蛋白也是诱导后表达的,且可以与柱子结合.
构建的表达质粒是测过序的,中间没有无义突变.而且我的目前蛋白诱导前后也有表达,且纯化出来的蛋白中跑胶也可以看到. 但哪个60KD左右的蛋白又是怎么回事呢,万分困惑中,求高人指点...
难道是蛋白降解了么,用的是BL21(DE3)的表达菌株