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标题:【求助】SDS-PAGE的条带弯弯曲曲...

鹿奔奔[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE的条带弯弯曲曲...


SDS-PAGE的条带弯弯曲曲，~~，波浪型，为何？条带颜色较浅，可以重新染色，脱色吗？
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先要排除配胶问题，胶的质量要好。你看一下电泳槽的铂丝，看看是否弯曲得很厉害？如果是，就把它弄直了。
可以重新染色脱色
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
另外，如果你用 的是北京六一的电泳槽的话还要注意胶板底部是否留有气泡，染色比较浅没有必要脱色后再染的，直接染就可以了，但是要注意你的染色液是否配了很久或用过很多次，如果是的话也有可能造成显色较浅的现象。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

倾斜或扭曲的条带的原因与处理(翻译自伯乐说明书)
a. 上样孔周围的聚合太弱。解决： 积层胶溶液在倒胶前彻底脱气；将过硫酸铵或TEMED的浓度增加25%，同时在倒胶前以TEMED擦拭梳子。
b. 样品中的盐。解决：通过透析、过柱脱盐等方法除盐。
c. 胶表面不平。解决：降低聚合率。在分析胶上倾倒积层胶时要非常小心。
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
补充：有时电流太大也会使条带变形。
如果你的marker也偏浅，就是染色液的问题了。需要用新的染色液去染，多染一会儿。
如果你的marker正常，就是样品浓度太低。
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小野花[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳的时候有两种可能,一种是微笑现象:由于凝胶的不均匀冷却导致效果中间部分不好，凝胶中分子不同迁移率而造成， 在比较厚的凝胶中容易发生.
第二中是皱眉现象,由于垂直电泳时电泳曹不合适,凝胶同版组成的SANDWISH底部有气泡产生,或着靠近隔片的凝胶聚合不完全而产生.
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wsll[使用道具]
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发表于 2014-6-14 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果配胶严格按照分子克隆上写的仍然有皱眉现象那该怎么办呢？是要增加胶凝的时间吗？我通常分离胶45分钟，基层胶30分钟，这么长时间应该足够了吧？为什么还是不行呢？
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