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标题:【求助】丽春红染色的问题

BUK[使用道具]
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发表于 2014-6-17 10:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】丽春红染色的问题


丽春红配的时候0.1g先溶于冰乙酸，好象很难溶，不知道各位是怎么配的。
用的时候是转膜后封闭前还是封闭后洗干净再加丽春红呢？
反应时间是多久，我查了一些资料，配方和反应时间都有很大出入。
丽春红染液用过以后可以回收吗？可以的话一般可以用多久？
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guagua[使用道具]
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发表于 2014-6-17 10:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是很难溶。直接加水定容至1000ml，就全溶了。
转膜后立春红染色，见到条带后TBS洗脱，奶粉封闭就可以了。不过感觉这样配的立春红好像不是很好洗脱一样。5％脱脂奶粉最后也被染成粉红色了。不妨碍后续操作。
反应时间半分钟、1分钟？。很短时间就可以看见条带。
用后我没有回收过，反正配了1000ml，估计western做完了也用不完。
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-6-17 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们开始的丽春红很难洗脱，后来过滤后收集所得滤液来染色，再用TBST洗就好多勒。如果膜上有颜色，可能会影响后面结果。
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yonger[使用道具]
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发表于 2014-6-17 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没什么影响啊
你丽春红检验完后有水洗几分钟,就算有一些颜色还在膜上,再你下面的封闭时间内也洗脱了
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发表于 2014-6-17 10:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
确实如果膜上有些丽春红在上面，封闭的时候也可以洗掉。用预染Marker一般就不染了
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发表于 2014-6-17 10:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以回收的
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发表于 2014-6-17 10:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也回收过
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BUK[使用道具]
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发表于 2014-6-17 10:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教丽春红的配方？
最近又重新配过了，还是不理想。把膜浸到丽春红里面，马上就整张膜都是红色的，蛋白条带倒是看不出来。前几次都以为没有转上去，把膜扔了，后来试了一下后续的步骤，倒是有条带的。等于丽春红完全没有起到指示作用。
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发表于 2014-6-17 10:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
丽春红染色液配方
储存液：2%染料溶于30%（w/v）三氯乙酸和30%（w/v）磺基水杨酸中
染液：用1%（v/v）乙酸按1:10稀释储存液。丽春红最终浓度为0.2%。
这是我在Millipore的蛋白质印迹手册上看到的配方。我曾经用这个配方染过PVDF，然后测序，没有任何问题。但是不知道适合不适合你的实验。
祝你顺利。
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lxh031[使用道具]
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发表于 2014-6-17 10:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上的是按照分子克隆上的。
我是称1.0g用1.0ml乙酸溶解，再定容到100ml。
可以回收反复用，我这个配了3年了都还在用。
染色后用DDW反复的洗几次，再用封闭液封闭过夜（最好放在摇床），都很干净了。
我昨天还做了，效果都很不错。
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