小中大我用考马斯亮蓝染色的方法作BSA标准曲线,怎么也做不出来!4mg/ml,5mg/ml,6mg/ml,7mg/ml,8mg/ml,10mg/ml的bsa在595nm下的吸光值没有明显的区别,还出现浓度越大,吸光值越小的现象,真是令我哭笑不得,请高手指点,谢谢!
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你设定的不同BSA浓度差别不大,所以吸光度也不会相差很多;
你测得浓度越大,吸光值越小,可能是由于放置时间久了,因为放置较久的试剂产生的光吸收值较低。
用考染法测蛋白浓度作BSA标准曲线时,最好是每个浓度作2~3次重复,相同浓度的BSA测完OD值后取平均值作曲线。如果用同一个比色杯来测定蛋白质浓度,则应当先测量低蛋白浓度的样品,避免因Bradford染料吸附而带来误差。
测量时间最好不要过长,加完Bradford染液后应在30min内测完所有BSA及待测样品的OD值。