蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】SDS-PAGE问题：各样品之间的条带相互扩散

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 29  1/3 123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】SDS-PAGE问题：各样品之间的条带相互扩散

vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
1

发表于 2014-6-27 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE问题：各样品之间的条带相互扩散


我在跑sds电泳式，各样品之间的条带相互扩散,各跑道不能清楚的分开。但是marker还可以，不过里面也有杂条带。我没有截图，不好意思。反正就是我的蛋白条带很多都连成一条直线，连梳子孔中间都有，银染考染都是如此，请问是怎么回事，是蛋白加的太多么？但是条带也不非常浓啊。还有我银染的时候，marker很清楚，然后样品比较黑，杂带很多，目的带也是连成一条直线，梳子孔也有，郁闷，在线等答复，写写
顶部
jujuba[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79697
精华 0
积分 612
帖子 903
信誉分 100
可用分 5331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
2

发表于 2014-6-27 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加样量过多或者加样孔泄漏
顶部
vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
3

发表于 2014-6-27 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
加样孔泄漏 请问是怎么回事啊？我怀疑是不是我样品的原因，我是亲和层析洗脱液从柱子上洗下来的抗原，就是免疫沉淀反应，洗脱液事低PH值，是不是那个东西影响的啊？我加了8Ul昨晚考染还是那个样子。
顶部
vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
4

发表于 2014-6-27 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我加样的时候没有加到别的孔里，枪头也都是加一个换一个的，这是怎么回事啊？
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
5

发表于 2014-6-27 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
估计是pH值的原因，
或者调一下胶的浓度，
胶的浓度太大也不好跑。
顶部
vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
6

发表于 2014-6-27 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电泳缓冲液ph我刚看了啊，8.37应该没问题的，我配胶的溶液都是倒掉重新陪过的，怎么还是这样啊？我郁闷死了，你说的ph是什么ph啊？我样品加了tri－HCL调成接近中性了啊，再说那个也没什么大影响吧?
顶部
caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
7

发表于 2014-6-27 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问你跑电泳时的电压为多大？跑了多长时间。你的电泳缓冲液是否长菌了，长菌后也会出现你所说的情况。建议您重配点泳缓冲液。
顶部
vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
8

发表于 2014-6-27 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电压浓缩胶75V，分离胶150。总共2个小时多点，具体时间没看。电泳缓冲液只用过2次，没有细菌。我想不是这个问题，因为我跑其他的样品没有问题。我现在就怀疑是我的洗脱液的原因，但我不知道怎么克服，请各位帮我想个办法，谢谢
顶部
vtongli[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107987
精华 1
积分 283
帖子 221
信誉分 102
可用分 1926
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
9

发表于 2014-6-27 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我加样后跑的时候，溴酚篮好像跑得也不直，比较宽，样品貌似没有被浓缩。
顶部
caihong[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73197
精华 1
积分 795
帖子 1206
信誉分 102
可用分 6856
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
10

发表于 2014-6-27 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳的目的条带是不是很深，如果是就是上样量大了。您说溴酚兰不压成一条线也属正常情况。建议把浓缩胶长度做长一些。
顶部
 29  1/3 123››