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标题:【求助】为何分离胶浓度一变，就跑不出条带？

douding66[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为何分离胶浓度一变，就跑不出条带？


在其它条件相同情况下，我用12%分离胶可以跑现蛋白条带，而用6%分离胶却跑不出蛋白条带？
我用6%、8%、10%、12%分离胶试过。6%分离胶只见一条竖的蛋白痕迹，8%的在一条竖的蛋白痕迹中可见一条横带，10%的在一条竖的蛋白痕迹中可见三条横带，12%可见分离清楚的横条带。不知何原因。
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jkobn[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶的浓度不同所分离的蛋白也不一样，10%的胶30KD以下的蛋白就不能分离
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发表于 2014-6-30 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶的浓度不同所分离的蛋白也不一样，10%的胶30KD以下的蛋白就不能分离
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douding66[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的目的蛋白分子量为100、120KD。参考书上讲应用8%的分离胶。若条带分不开、转染可能就难。不知问题在哪里，如何解决？
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

How big is the target protein you want to see?
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2014-6-30 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的目的蛋白是185kd的，跑10%的胶，转膜后暴光的效果不错，我跑6%的胶同样的蛋白样品却没有能暴出光来。我建议你用10%的胶试一下，也能分得开的
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2014-6-30 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

yes, 10% gel, 200v 1h and tranfer 50v 1h on the ice, it will be ok, good luck
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lixi559[使用道具]
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发表于 2014-6-30 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室也出现过类似的情况，但好象和你说的情况刚好相反，我们用15%的分离胶没有分出蛋白条带，所有蛋白都靠在一起没有跑开。换用12%的胶后蛋白条带的分离效果就非常好了。我们认为相对于你所分离的蛋白分子量合适的胶的浓度范围，高浓度的分离胶使得各个蛋白条带间的距离缩小了，分离效果下降了。我们目的蛋白的分子量是30KD左右。希望对你的实验有所帮助。
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发表于 2014-6-30 17:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

询问一下，你的EB诱变线粒体DNA缺失作的成功吗？
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发表于 2014-6-30 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同意二楼观点~~~
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