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标题:【求助】SDS-PAGE 胶为什么不能凝？

moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE 胶为什么不能凝？

我按分子克隆上的配方来配分离胶，但过了两个小时胶还不能凝？
不知是什么原因？
在配丙稀酰铵－甲叉双丙稀酰铵贮存液后我测的PH值有11.2，需要调PH值吗？
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能是室温太低,我遇到过这种情况,现在我我配胶之后都放37度的孵箱,效果挺好的.
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plaa[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶凝固是需要AP和TEMED的，也就是所谓的引发剂和增速剂。如果你的AP放在室温下太久的话，对胶凝固是有影响的，胶就不会凝固了，最好配好后分装于－20度保存，一次性使用。还有，单体配好后，最好过滤后再使用。室温低是会影响凝固，但一般不会2个小时了还不凝固的。个人建议，单体最好用进口试剂配，我们实验室用的是AMRESCO的。
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发表于 2014-7-1 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶凝固是需要AP和TEMED的，也就是所谓的引发剂和增速剂。如果你的AP放在室温下太久的话，对胶凝固是有影响的，胶就不会凝固了，最好配好后分装于－20度保存，一次性使用。还有，单体配好后，最好过滤后再使用。室温低是会影响凝固，但一般不会2个小时了还不凝固的。个人建议，单体最好用进口试剂配，我们实验室用的是AMRESCO的。
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plaa[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
补充一点,APS是不是新配的?(APS新配的放4度冰箱只能保存一周)TEMED有没有变质?
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我第一次做SDS-PAGE,所有的试剂都是新配的，
但是在配丙稀酰铵－甲叉双丙稀酰铵贮存液时，测的PH值高达11.2，你们配时有测PH值吗？
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发表于 2014-7-1 15:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 moonlight45 于 2014-7-1 15:34 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我第一次做SDS-PAGE,所有的试剂都是新配的，
但是在配丙稀酰铵－甲叉双丙稀酰铵贮存液时，测的PH值高达11.2，你们配时有测PH值吗？

我测了，一般为6.4～6.5．APS没必要－20度，4度下一般用一周是完全没问题的．可能与温度低还是有点关系的．最近我也出现了这个问题．
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果确定为室温石太低,可将AP量增加50%,效果非常好.
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xiaoxiaoniao[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在是室温一般没有问题的，即使是温度影响也不至于2个小时都不凝，所以个人认为是试剂的问题，且很可能是AP和TEMED的问题，AP 4度保存之间还是比较长的，而且你刚才说了试剂是新配的，所以AP出问题的可能性不大，你可以检查一下你的TEMED，如果是实验室原来就有的，可能由于时间较长已不适宜使用。另外我没有侧过丙烯酰胺的PH，个人认为如果比例没错，所有水也没有问题的话，这方面出问题的可能性也比较小
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发表于 2014-7-1 15:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本人配的胶也是四个小时都不凝固呢,AP新配,TEMED都是刚买的,会不会是丙烯酰胺出问题,配成30%时是按29:1加至100ML水定容真找不出什么原因会不凝固呀
请高手帮忙呀!!!!
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