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标题:【求助】浓缩胶不凝？

finger[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】浓缩胶不凝？


请问各位大侠，正常情况下，30％丙烯酰胺的PH值应是多少？
我测得PH为6.4．这正常吗？是不是有杂质丙烯酸含量过高？谢谢！
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发表于 2014-7-1 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 finger 于 2014-7-1 15:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请问各位大侠，正常情况下，30％丙烯酰胺的PH值应是多少？
我测得PH为6.4．这正常吗？是不是有杂质丙烯酸含量过高？谢谢！

如果按正常操作，也就是将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用滤器（0.45μm孔径）过滤除菌后。其PH直应该在6.5－7.0之间，6.4可能是有点偏低，但是如果单纯是为了跑PAGE胶的话，应该没有太大影响。但是要置棕色瓶中保存于室温。
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finger[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢！我是用29.2g丙烯酰胺，0.8g甲叉．加至100ml.试剂是进口的，做了一年多没出问题．昨天新配的东东在灌胶时凝得奇慢．所以在想是不是这个有问题？TEMED应该是没有问题的．还有可能是其它方面的问题吗？
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 finger 于 2014-7-1 15:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

谢谢！我是用29.2g丙烯酰胺，0.8g甲叉．加至100ml.试剂是进口的，做了一年多没出问题．昨天新配的东东在灌胶时凝得奇慢．所以在想是不是这个有问题？TEMED应该是没有问题的．还有可能是其它方面的问题吗？ ...

如果你能确定TMEMD没有问题的话，那么其它影响因素还包括配胶其它试剂的配置是否有问题，比如SDS、过硫酸铵的配置，楼主用的30％的丙烯酰胺一直是这样配的吗？我们从来都是按19：1配的。还有就是温度的影响，如果温度低就凝固的慢些，高就凝的快些。还有就是一定要确定配好的分离胶要混匀，否则不但会造成胶凝的慢，凝的不均匀，还会对跑胶的结果造成很坏的影响。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看看你的过硫酸铵有没有问题，过流酸铵在4度放两个星期后，就不可以再用了，否则就会发生胶凝的慢的现象，甚至胶不能够凝。
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kuohao17[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做的SDS胶也是凝固得很慢,药品AP是新配的,其它的放在4度冰箱,两个小时还没有凝固
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finger[使用道具]
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发表于 2014-7-1 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做过一年多的电泳．只是最近在出现这种状况．
APS肯定是新配的．一般情况下我只用一周．当然是4度保存．
TEMED上个月还用得很好的．
丙烯酰胺：甲叉　29.2：0.8一直是这个比例．从没出问题．当然也有的是29：1．这个是差不多的．
关于胶是否混匀，我肯定不会有这样的低级失误．做过不知多少遍了．
气温倒是有点低．但上个月温度也低呀，也不至于这么慢．
今天我将TEMED的量增加了近50％．好像快一点．不过仍不理想．
所以出现这个状况很奇怪．所以才来请教各位大侠．不是疑难杂症又何劳何位大侠呢？
问一下各位：你们APS和TEMED的量分别加多少？我浓缩胶4％，分离胶8％．6ml胶里加APS60ul（相当于1％）,TEMED 6ul（相当于0.1％）．
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 小中大

你配的胶里面AP和TEMED加的太多啦，不过这不会是胶不凝固的原因，有一种情况，你看一下你的AP是不是放了太久了，我是说固体AP，它是会吸潮的，保存的时候要注意。如果是这样的话，建议你换AP。TEMED应该是装在棕色瓶里的比较好一点。我们是碰到过AP配好后放在室温久了（大约一周多吧），胶不凝固，换上新配的就没问题了。一般10mL胶加50μLAP，TEMED用7－8μL左右。一般SDS-PAGE分离胶用12％的。
回gxhnty ：放在4度当然凝固的慢，放在室温下正常情况1小时左右就会凝固的。太久了还不凝固就有问题了。
祝你们试验成功！
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mamamiya[使用道具]
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 小中大
本人倒胶后置室温,且一天做了三次胶每次放置3个小时都不凝固,AP新配,TEMED刚分装,是不是丙烯酰胺不纯?还是甲叉丙烯酰胺放置太久了,不起作用?
刚看了分子克隆第三版其实SDSPAGE胶的凝固主要是丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺在AP作用下发生凝固,TEMED只是促进剂罢了,所以问题是不是丙烯酰胺不纯,本人配制30%溶液没有过滤,直接定容
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 小中大
如果试剂都没有问题，那么问题就应该出在环境温度上。
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