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标题:【求助】为什么蛋白在bio－rad的IEF cell上不聚焦？

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发表于 2014-7-2 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】为什么蛋白在bio－rad的IEF cell上不聚焦？


我用的是分步提取法，裂解液按照bio的试剂盒用自己的药品配置，提出的蛋白大概8微克/ml
浓度低吗？
转到第二向时，胶上什么都没有
银染偶尔会有2-3个点
郁闷 迷惑
高手指点一下吧
不然真不知道怎么毕业了
我也查了一些文献
方法类似 但是我为什么没有结果呢
是什么影响的呢？
多谢指教！
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-7-2 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白浓度仅为8微克/ml，你的上样量是几微克？这样低的上样量有蛋白点才怪。
改进： 提高制备样品的浓度。再试试。
祝你好运！！
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fox_79[使用道具]
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发表于 2014-7-2 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

8微克/ml？开玩笑吧，这么低的浓度用什么办法测量啊，那算上样量得十几毫升啊，晕！
用Bradford法或BCA法测量的误差都比这大几十倍，八成你蛋白没提出来。
建议重新提取蛋白
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发表于 2014-7-2 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
抱歉抱歉 应该是8微克/微升 但是好像也不高唉
bio－rad的IEF仪器 好像很容易受盐的干扰 我只好提取更高浓度的蛋白
我正在养细胞中
请大虾给我个分步提取的裂解液配置方法 还有蛋白提取方法
让我好好比较一下自己差在哪里
谢谢！！！
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发表于 2014-7-2 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

8微克/微升还太低吗
我的比这还低
点还是有的 不过不多呢
各位大侠 组织中提蛋白有没啥好招呀
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发表于 2014-7-2 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可是 具体怎么个着手法呢？
我的导师说 他实验的时候 蛋白浓度是20多微克/微升
我还差的远啊
可是分步提取 花费很长时间
很难避免降解
怎么办呢？
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发表于 2014-7-2 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

又要提蛋白了
细胞长的很好
这次提15大瓶！
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发表于 2014-7-2 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白浓度已经够了，银染上样量100ug应该足够了。应该从其他方面找原因。
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2014-7-2 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分部提取是怎么提呀？
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ukonptp[使用道具]
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 小中大
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