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标题:【求助】用缓冲液提取的蛋白,如何进行浓缩啊?

nikonun[使用道具]
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【求助】用缓冲液提取的蛋白,如何进行浓缩啊?


用缓冲液提取的蛋白,如何进行浓缩啊?大哥哥姐姐,因为我要跑SDS-PAGE
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remenb[使用道具]
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浓缩的方法有很多,根据你的样品而定。
冻干:适用于大量样品的浓缩。能保持蛋白的活性,而且能长时间保存。
超滤:商品化的超滤膜可以方便快捷的浓缩你的样品,只是价格贵些,而且对样品有吸附,所以少量的样品不大适合。
实验室常用的还有冷阱离心机,只是慢一些。
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fsdd817[使用道具]
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浓缩的方法有很多,推荐以下三种:
1、冷冻干燥,样品至于冷冻干燥仪内,可将样品冻成粉末
2、聚乙二醇浓缩,可将样品先透析平衡,然后用聚乙二醇包埋,在4度浓缩。
3、超滤法浓缩,此法方便快速。
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tuuu2[使用道具]
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浓缩的方法有很多,推荐以下三种:
1、冷冻干燥,样品至于冷冻干燥仪内,可将样品冻成粉末
2、聚乙二醇浓缩,可将样品先透析平衡,然后用聚乙二醇包埋,在4度浓缩。
3、超滤法浓缩,此法方便快速。
......

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恩,比较推荐第二种,一般我们实验室是将待浓缩的蛋白溶液放入透析袋中,然后在外覆盖PEG或者其他的强吸水凝胶(包括自己实验室合成的可以吸水膨胀1000倍的凝胶),然后4度冰箱里进行浓缩,效果很好,不过必须得注意控制时间,时间过长会使得浓缩过度,蛋白质絮凝(或者也有可能是缓冲液浓缩后造成盐浓度过高而形成盐析,不过我那次的失误操作得到的蛋白是不能复溶的)。
另外也可以用MILLIPORE出的浓缩离心管进行浓缩,缺点:投入成本太高太高:)
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orangecake[使用道具]
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请问:
丙酮沉淀怎么样?有人说这样会造成蛋白质的浪费,又说可损失1/3以上,请教中...........
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zhenxin[使用道具]
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6
 

有蛋白浓缩试剂盒,如果你的样品不多建议使用!
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fei1226com[使用道具]
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我觉得其实没那么麻烦的,常用简单又有效的办法有两个:
1)丙酮浓缩:书上介绍加入2倍体积的丙酮,混匀,-20度冷冻15mins-高速离心10mins-弃去上清,并把残留的丙酮挥发干(可以高温挥发也可以吹干,目的是防止残留的上清影响上样量)然后加入一定体积的水和样品溶解液就行了,整个过程需要大概半小时,需要的丙酮较多。
2)用三氯乙酸沉淀:配制饱和的三氯乙酸溶液,按样品:三氯乙酸=9:1比例加入浓缩液混匀,-20度冷冻15mins-高速离心10mins-弃去上清(尽量干净,可用滤纸稍微把管壁上的上清吸干),然后加入10微升水和10微升0.2N NaOH,充分混匀,加入样品溶解液即可。
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moonlight45[使用道具]
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你可以用离子交换法进行浓缩。
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standbyme[使用道具]
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我用丙酮溶解后的蛋白在5度冰箱中放置,又出现了沉淀
请问为什么会出现沉淀,沉淀又是什么啊?
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c86v[使用道具]
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5度的沉淀是蛋白,低温有利于蛋白的沉淀,一般零下20度过夜,沉淀会更完全一些!参考!
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