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标题:【求助】问题请教：包含体蛋白如何免疫兔子？

flyxx05[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】问题请教：包含体蛋白如何免疫兔子？


我 说表达的蛋白主要在包涵体里，请问如何要用该蛋白免疫兔子制造多抗应如何操作？请高手详细的给在下讲解一下哦 ，多谢了！！！
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚看了另一位战友的帖子写得很详细，把包含体SDS-PAGE切胶纯化后就行了。
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5490092&sty=1')
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flyxx05[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢~不过我还有个疑问，用上面的方法如何定量蛋白呢？
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发表于 2014-7-3 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
直接SDS－PAGE，然后用已知量的BSA剃度做参照，
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flyxx05[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

相关疾病：
睑腺炎
谢谢高手的指点。
我上样的时候发现加了上样缓冲液的包涵体蛋白仍然不溶解致堵塞针眼，高手有什么好的办法吗？
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

表达后的菌体，最好洗涤一下，尽可能得到纯的包涵体沉淀，然后先磨细一点的，再用8M尿素溶，然后离心一下，上清再去加上样缓冲液
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flyxx05[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感谢你的解答。请问加入尿素后是否对兔子会产生毒性而致死呢？
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49888[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢高手的指点。
我上样的时候发现加了上样缓冲液的包涵体蛋白仍然不溶解致堵塞针眼，高手有什么好的办法吗？

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sds的溶解能力不低于尿素
所以我估计你提到的现象是没有很好的处理 比如样品太多缓冲液态少 上样前需要离心
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49888[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢你的解答。请问加入尿素后是否对兔子会产生毒性而致死呢？

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如果你是用切胶回收的办法 大可不必考虑尿素的危害了 含量很少
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

SDS对于抱憾体的溶解度根本不能和8,9M尿素比的，当然溶解性更好的是6M的盐酸胍。
而且高浓度的 SDS对于动物体的毒性是很大的
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