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标题:【求助】蛋白表达太少怎么办

dior[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白表达太少怎么办


我最近要开始试验了，因为是新手，有很多问题弄不清，想咨询一下大家。
我要检测的目的蛋白是46K，主要在下丘脑，在胃中也有。我想看正常组和疾病组此蛋白在胃肠表达的差异。据所查资料推测，疾病组表达是减少的。但是我看了一篇文献，在正常组此蛋白在胃表达的条带也不是很浓，（我把图附上），大家帮我看看想这样的表达可以吗？
我怕疾病组会更少，都看不出条带了。这两天都准备买抗体了，又不敢买了，怕表达太少。
1——下丘脑，2——垂体，5——胃


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2014-7-3 17:50
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PINK[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做吧！不做怎么知道？
不知你的文献是国内的还是国外的？
蛋白表达量少，可以通过加大上样量和改变western条件来解决
还有一点，抗体的质量要有保证！
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dior[使用道具]
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 小中大


QUOTE:
原帖由 PINK 于 2014-7-3 17:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
做吧！不做怎么知道？
不知你的文献是国内的还是国外的？
蛋白表达量少，可以通过加大上样量和改变western条件来解决
还有一点，抗体的质量要有保证！ ...

我的文献是国外的。我打算买的抗体是santa cruz的。我觉得实验的风险好大呀1
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

表达少不是问题，只要能做出有表达你就可以大胆的购抗体了，在Western中可以通过一定的方法增加表达量的。祝你好运！
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dior[使用道具]
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 小中大

谢谢大家的鼓励！
有没有战友用过santa cruz的山羊抗大鼠的一抗？
我的一抗就是山羊抗大鼠的，说明书说二抗推荐用驴抗山羊，但是santa cruz的太贵了，0.5ml要$60，在中山没有搜到国产的。而且驴血清也不好找。
有没有人用过santa cruz的山羊抗大鼠一抗做western？二抗用的是什么？可以用兔抗山羊的吗？效果如何？
我这几天准备订抗体，但一直不敢订，想听听大家的经验哦！
谢谢！
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用过santa cruz的山羊抗大鼠一抗,挺好的,二抗只要是抗大鼠的就行了,效果不错的.
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dior[使用道具]
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发表于 2014-7-3 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 orangecake 于 2014-7-3 17:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我用过santa cruz的山羊抗大鼠一抗,挺好的,二抗只要是抗大鼠的就行了,效果不错的.

我后来订了兔抗人的多克隆抗体，因为听学校老师说可以用于大鼠，说明书上也写了可以用。
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dior[使用道具]
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 小中大


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原帖由 orangecake 于 2014-7-3 17:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我用过santa cruz的山羊抗大鼠一抗,挺好的,二抗只要是抗大鼠的就行了,效果不错的.

不对吧，老兄，二抗应该是抗山羊的吧。
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