【求助】SDS－PAGE电泳时间太长，如何调整？

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标题:【求助】SDS－PAGE电泳时间太长，如何调整？

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发表于 2014-7-4 15:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第一次跑SDSPAGE，　
分离胶用的是12%，
在整　个跑的过程中，
电泳时间太长，
如何调整呢？
浓缩胶我跑了一个小时才进入分离胶，用的是90V，
分离胶最先用的是150V跑了一个小时，
发现太慢，
调整到200V再跑了一个小时，
后来又调整到220V跑了一小时，
现在都还有3厘米没有跑完，
听别人说，
跑个PAGE三个多小时就可以搞定了，我应该怎么办，
缩短跑胶时间？

H2O[使用道具]
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发表于 2014-7-4 15:14 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不敢把电压开得过大，
怕条带跑得不好，
我可否把分离胶浓度调为10%呢，
我要的蛋白大概44KDA

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发表于 2014-7-4 15:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

60KDA 的蛋白跑10%的胶是可以的。
电泳的时间长，是不是你的电泳缓冲液有问题？

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发表于 2014-7-4 15:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

60KD的蛋白，１２％的胶，２００Ｖ，２小时足够跑完了．
检查一下你的电流正常不？
我这通常用１２０－１８０Ｖ，初始电流大约在２５左右（１８－３０），
如果电流不正常（一般是太小，比如在我这只有１０以下），则检查：
１．running buffer的浓度对不？
２．胶里是否混有气泡？

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发表于 2014-7-4 15:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还有，如果用六一的电泳槽，会不是是跑胶前忘记把灌胶时密封用的胶条撕下了哪？
呵呵，我有一次就犯了这样一个低级错误，结果是干冒气泡，指示剂前沿就是不往下跑
建议检查一下先

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发表于 2014-7-4 15:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢大家，
缓冲液没问题，
胶里也没有气泡，
检查了一下电泳槽，
是北京六一仪器厂的，
难道就是acui提的六一电泳槽？
的确我是没有把封边用的琼脂糖去掉，
再试试看！

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发表于 2014-7-4 15:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

44KD的蛋白完全可以用10%的胶跑，我天天都这么用，效果也很好的啊，我们二十多KD的有时都用10%的胶，不过这样就不能用很高的电压，要是电压高了条带很难看的。四十多KD的一点问题都没有，估计浓缩胶80-90V50MIN就可以了，分离胶200V60-75MIN 就好了，要是还不行的话就是你的缓冲液有问题了，不过我们的BIO-RAD的仪器。楼主好运。。。DXY战友春节愉快！

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发表于 2014-7-4 15:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

将封胶用的琼脂去掉后，
仍然跑胶速度慢，
问了一下师兄，
他们的只需三个小时左右就跑完了，
条件是一样的，
我估计跑胶时间长可能是蛋白本身的原因！

glass[使用道具]
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发表于 2014-7-4 15:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

胶可能没压实可能使上下槽有些相通,使得电流低

H2O[使用道具]
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发表于 2014-7-4 15:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

应该不是这个问题，
另外一个实验室的他自己弄的胶，
不过表达载体同我一样，
也是跑了好几个小时，
应该不是胶的问题！

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