蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】小肽表达

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】小肽表达

xue258[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
1

发表于 2014-7-4 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】小肽表达


大家多多交流,以前做过真核表达.现在做大肠杆菌表达抗菌肽.希望大家说说自己的经历
顶部
xue258[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
2

发表于 2014-7-4 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
自己先顶一下,个人觉得做小肽有点困难.问题就是易被宿主菌中的酶给降解.所以表达量都不是很高.不知各位同仁有没有类似的感受?
顶部
fsdd817[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78590
精华 1
积分 590
帖子 795
信誉分 102
可用分 4841
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-30
状态 离线
3

发表于 2014-7-4 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做融合表达可以减少降解 ，如：Trx－His－蛋白酶切位点－目的肽。如果直接把目的蛋白放在ATG后面的话，还有一个问题就是Met的去除。
另外，楼主的抗菌肽表达后的复性问题怎么解决呢？ 还有你表达的抗菌肽的毒性怎样？
顶部
BOSS2011[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74568
精华 0
积分 427
帖子 534
信誉分 100
可用分 3476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
4

发表于 2014-7-4 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

表达小分子肽时,一般将小分子肽和大的稳定蛋白融合表达,可以提高小分子肽在体内的半衰期.请教小分子肽一般放在融合蛋白的N端还是C端?
linker一般怎么选择?看有用几个甘氨酸的,也有用丝氨酸的?
请教!~!!!
顶部
fei1226com[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79957
精华 0
积分 599
帖子 898
信誉分 100
可用分 5286
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
5

发表于 2014-7-4 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
蛋白酶切点用什么蛋白酶?凝血酶还是肠激酶?不会引入新的氨基酸?
小分子肽在体内很容易降解的.一般选择一个无毒性的配基做融合表达.
小分子肽一般不好纯化和复性的.
顶部
glass[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76223
精华 0
积分 715
帖子 1109
信誉分 100
可用分 6373
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
6

发表于 2014-7-4 16:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道大家有没有用过pTYB系列载体的！看文献上有人用来表达17个氨基酸的小肽，好像效果还可以。大概的意思也是融合表达，就是切割的方式有点不同，内含肽自己切割。我也打算表达一个20多个氨基酸的小肽，不知谁做过这方面的工作，请给点指导，谢谢！
顶部
xue258[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
7

发表于 2014-7-4 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外，楼主的抗菌肽表达后的复性问题怎么解决呢？ 还有你表达的抗菌肽的毒性怎样？
我们实验室以前做的是毕氏酵母真核分泌表达,表达量还行.因为是分泌表达对宿主没什么影响.但就是在分离纯化上出现问题.做了分子筛和反向色谱,就是分不开.拿不到纯品.老板叫我做原核表达,我初步准备融合HIS做,选择的是PET-28载体.因为以前没做过原核表达,正在摸索中.先做带有HIS看看有没有活性.我看看有文献上表达小肽都要去掉融合蛋白的.
顶部
xue258[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
8

发表于 2014-7-4 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做融合表达可以减少降解 ，如：Trx－His－蛋白酶切位点－目的肽。如果直接把目的蛋白放在ATG后面的话，还有一个问题就是Met的去除。
是的,看到有文献用CNBr去met的这样得到天然n端的肽
顶部
xue258[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
9

发表于 2014-7-4 16:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
表达小分子肽时,一般将小分子肽和大的稳定蛋白融合表达,可以提高小分子肽在体内的半衰期.请教小分子肽一般放在融合蛋白的N端还是C端?
顶部
xue258[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
10

发表于 2014-7-4 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
linker一般怎么选择?看有用几个甘氨酸的,也有用丝氨酸的?
个人认为,n端和c端不是主要问题，要看自己的目的.如果你的肽发挥作用的n端,可以考虑放在c端.还有很少用LINKER的.这样挺麻烦的.
顶部