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标题:【求助】SDS-PAGE后染色的蛋白条带怎么回收？

BUK[使用道具]
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发表于 2014-7-4 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】SDS-PAGE后染色的蛋白条带怎么回收？


请教SDS-PAGE后染色的蛋白条带怎么回收？直接用缓冲液浸提可以吗？
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vivian4123[使用道具]
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发表于 2014-7-4 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以，但是回收率会很低，而且需要多次浸提来提高回收率，到最好你的蛋白被稀释得很厉害，同时也不稳定了。
可以做电洗脱，就是绑在透析袋里面，电泳就是了，蛋白会跑到透析袋的一侧，吸出就行了。
最好是用电洗脱仪，原理和透析袋电洗脱一样，不过要方便快捷的多。
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BUK[使用道具]
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发表于 2014-7-4 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为实验室没有电洗脱仪，所以只能用些简单的方法。老板认定让我用缓冲液浸提，请问有详细的方法吗？
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发表于 2014-7-4 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

液氮研磨，然后想用什么用什么溶，我试过多次了，没问题！
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-7-4 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我曾经试过，把条带剪下来切的碎碎的，用适合你蛋白的buffer溶，蛋白稳定的话可以水域保温，并且保持随时能震荡，这样还是可以得到少许蛋白的。但是非常少。
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-7-4 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
液氮条件那么剧烈，不会使蛋白失活吗？而且液氮研磨的具体操作条件是怎么样的？电泳那么小的上样量，多少块胶的蛋白才能免疫一只小耗子啊？继续关注Ing！
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bamboo16[使用道具]
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发表于 2014-7-4 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我记得六一厂好像有卖电洗脱槽的，原来觉得很好笑，不知道有没有了，你可以和六一厂联系一下看看，看有没有这个东西，估计也不是很贵。
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BUK[使用道具]
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发表于 2014-7-4 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先，我说的SDS-PAGE，此中蛋白是没有活性的所以也不怕液氮“伤害”。其次，免疫动物所用的蛋白不是都需要有活性的。最后一个问题就是，我每板胶可以回收到0.1mg左右的蛋白。以前在遗传所动物中心做免疫兔子，他们要求提供2mg蛋白，一般15板左右足够。
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BUK[使用道具]
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发表于 2014-7-4 17:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外补充一点，我所在实验室是研究植物的，每次提取蛋白都是把植物材料液氮研磨后，加buffer提取，好像不会影响其活性，所以我觉得低温对蛋白是没有你所说的那种伤害的。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-7-4 17:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的目的是回收后转PVDF膜测序，可是每次好像都回收不到蛋白质，跑PAGE没有带。不知道各位还有什么办法。
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