【求助】Westhern blot X片无法解释！

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标题:【求助】Westhern blot X片无法解释！

mogu[使用道具]
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发表于 2014-7-5 16:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

二抗孵育后，TBST洗三遍，10min/遍，然后将膜夹到吸水纸上，加1：1混好的发光液（中衫公司），用保鲜膜包好，最后曝光洗片，结果就出现了下面那张图，怎么把吸水纸的花纹给曝出来了，有遇到这样情况的吗？大家帮我分析一下原因！我自己感觉问题就在发光这个环节，但是解释不清楚！

附件

2014-7-5 16:35

45154737.snap.jpg (25.2 KB)

mogu[使用道具]
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发表于 2014-7-5 16:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这是我用的吸水纸。

附件

2014-7-5 16:35

19241484.snap.jpg (53.94 KB)

taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-7-5 16:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能是您的吸水纸上的花纹把胶片上的药膜给粘掉了！

finger[使用道具]
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发表于 2014-7-5 16:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我遇到过类似的问题，就是用一张纸放到片子的上边，报后就出现了纸上的字迹很正常的。

redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-7-5 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

发光液露到胶片上了。

abc816[使用道具]
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发表于 2014-7-5 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得是纸上有感光的东西存在，你在膜上加发光液显影时，纸也同时显影了，所以洗出来的片子就成了这样了。
你滴加发光液显影后，擦洗发光液时，换用干净滤纸试试。
你可以这样做对照鉴别一下，直接在保险膜上或者一小张新的PVDF膜上（未转印过）滴加发光液，然后按照你的操作方法，压片洗片试试，看看能不能洗出东西来。
祝好运。

mogu[使用道具]
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发表于 2014-7-5 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最后我确定是一抗的原因:一抗有降解,至于为什么会曝出吸水纸的花纹或许可以这样解释,降解的一抗中有某种成分对膜有破坏作用,使膜的通透性增强,在加发光液发光的时候,膜得背面,即跟吸水纸接触的那边沾到吸水纸上的东西,而在这当中就有可能含有荧光物质或酶,最后曝光就会出现上面得的现象.

windy+++[使用道具]
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发表于 2014-7-5 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

现在有很多类似的纸张制品都表标明不含荧光剂,荧光剂可以增加纸的白亮程度,我猜想很可能是你用的吸水纸是含荧光剂的吧,如果真是,改用滤纸吧