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标题:【求助】蛋白电泳的有关问题

=pkchen=[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白电泳的有关问题


各路大侠,帮帮忙,我用的DYCZ-24D型的迷你双垂直电泳槽,拔梳子的时候老有气泡窜入分离胶与浓缩胶之间的界面,并且灌的胶有花纹,我已弄的很匀了?
浓缩胶凝了之后,其上有很多的水,故槽子很短,拜托各位帮我分析一下原因?
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nvdabing[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1，请把玻璃板充分地夹紧，这样就不会出现缝隙，因此也就减少气泡产生的可能性；而且拔梳子的时候也应该动作轻柔小心，不要着急用力。
2，即使稍微有些气泡也没有关系，因为这样并不影响蛋白样品电泳。
3，灌的胶有花纹是不是说胶凝固之后在表明上出现的花纹？如果这样，很有可能是胶的一些成分不洁净，比如说是丙稀酰胺等含有杂质，应该用去离子水配置。
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2014-7-5 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

气泡可以用微量进样器轻轻赶走
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 小中大

我认为你拔掉梳子后有气泡是因为分离胶和浓缩胶之间的粘合不紧，不知你在做完分离胶凝固后是否用水冲洗了分离胶上的层面，然后再用滤纸条吸干水分。然后再做浓缩胶。
分离胶有花纹并且上层有很多水，而且分离胶缩短，假如是下面没有漏的话，可能是过硫酸氨或者TEMED加多了
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发表于 2014-7-5 17:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我认为你拔掉梳子后有气泡是因为分离胶和浓缩胶之间的粘合不紧，不知你在做完分离胶凝固后是否用水冲洗了分离胶上的层面，然后再用滤纸条吸干水分。然后再做浓缩胶。
分离胶有花纹并且上层有很多水，而且分离胶缩短，假如是下面没有漏的话，可能是过硫酸氨或者TEMED加多了
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发表于 2014-7-5 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

SDS电泳
谢谢，各路大侠帮忙，
旧的问题解决了，可新的问题又出现了，我用的电泳槽，第一次灌胶没有漏，但后面几次都有些漏，板子我已弄得很紧了，而且，插入梳子，老是一边松一边紧的。电泳的过程中，一边跑的快，另一边跑的慢。跑出来的条带有弥散的现象，用考染出来的胶板一片蓝。而且，样品跑完浓缩胶，不能压成一条线，该咋办？
请问PVDF膜用完一次如何处理才能重复使用？
请问PMSF怎样保存？大概多长时间？
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发表于 2014-7-5 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好.我用的也DYCZ-24D型的迷你双垂直电泳槽,我也刚开始跑电泳,你是怎么封的底?我用医用胶布封底很少成功过,老是要漏部分胶,而且加完分离胶后,到分离胶凝固时,胶面下降得比较多,你是怎么解决这个问题的.谢谢先
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发表于 2014-7-5 17:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胶面下降是由于水封时水的压力导致分离胶面下降。
但是，我也用24D型电泳槽，不用封底。不知道你的电泳槽是什么样的？
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发表于 2014-7-5 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上面的楼主，和你的一样，请问您转过膜吗？我做WESTERN BLOTTING 时，转移槽有些发热，放了一些冰袋，好像没用。而且，用丽春红染PVDF膜时，整个膜都变成了红色，无法去 除，膜上没有检测的信号，胶上也没蛋白，请问咋会事呀
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发表于 2014-7-5 17:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

dycz-24d型电泳槽我觉得设计的不错,基本不可能出现漏胶的情况,所谓封胶说就更不可能了,因为下面和册面都有胶条封住的.一边紧一边松的情况也很少见,除非你玻璃板坏了,两边快慢不同原因可能有很多
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