蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】单向SDS-PAGE可以做MOLDI-TOF质谱吗?

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标题:【求助】单向SDS-PAGE可以做MOLDI-TOF质谱吗?

pou[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】单向SDS-PAGE可以做MOLDI-TOF质谱吗?


文献中一般都是双向电泳后切点做MOLDI-TOF质谱,请问单向SDS-PAGE后切下一条带也能做MOLDI-TOF质谱吗?还是只能做MS/MS?
请教蛋白高手.
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8princess8[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以，但必须纯度要高些，比如说条带经过洗脱后。
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发表于 2014-7-7 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢.所谓洗脱是过柱子吗?
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以做，考染，切胶，脱色后酶解，然后再对酶解产物使用液相色谱分离，最后对馏分点板分析
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jkobn[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

MOLDI-TOF主要是针对单一蛋白的
可以考虑用Q-TOF分析
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2014-7-7 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一维胶建议还是用与LC相连的质谱比较好，目前主要有ESI和Q-Tof！
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发表于 2014-7-7 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果有自动点板机器人，可以做offline－MSMS分析
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发表于 2014-7-7 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢大家，但我的学校只有MOLDI-TOF（刚刚引进）, 与LC相连的质谱想都不敢想啊！
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发表于 2014-7-7 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一向的胶也可以用MALDI做，但是最好用银染，这样可以得到分子量较小的蛋白。比如我就用Tricine胶跑完后用MALDI鉴定了一个11KD左右的蛋白。但是一般来说想跑完一向后直接打MALDI，抠的蛋白分子量一定要小。最近有一篇CANCER RESEACH 上的文章也是跑完Tricine后直接MALDI的，你可以查看一下。
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发表于 2014-7-7 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Tricine胶是啥意思?
为什么一定要小分子呢?
40KD以上的蛋白鉴定得出来吗?
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