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标题:【讨论帖】定量PCR实验技术分享（解答定量问题）

挖挖挖[使用道具]
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发表于 2014-7-27 08:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【讨论帖】定量PCR实验技术分享（解答定量问题）

本人做过几年的定量PCR，有一定的经验。看到版里头有许多战友对定量有许多问题。愿意就定量PCR的问题与各位战友一起探讨。
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bring[使用道具]
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发表于 2014-7-27 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教一下
如果扩增曲线ct值比较靠后的话，32左右
一般有什么方法解决没有
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join[使用道具]
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发表于 2014-7-27 08:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bring 于 2014-7-27 08:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请教一下
如果扩增曲线ct值比较靠后的话，32左右
一般有什么方法解决没有

ct值比较靠后，对实验有一定的影响，因为经过那么多次的循环，酶的活性有可能有所下降，这时候扩增效率会有所改变（而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值）。因此最好能够把ct值往前移。
解决办法可以将模板加以浓缩或者抽干之后用少量水去溶解。
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standbyme[使用道具]
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发表于 2014-7-27 08:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教: 为什么合成的引物做不加摸板的对照也能扩增出目的条带,而内参用同样体系就没有呢?是引物被污染还是引物设计不好导致的?
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-7-27 09:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 挖挖挖 的帖子

请教：我做的目的基因的Ct值总在38－39左右，有什么好办法降低它的Ct值？（模板DNA是用20ul水溶解的，每次用8ul左右，浓缩的方法好像行不通）
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挖挖挖[使用道具]
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发表于 2014-7-27 09:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教: 为什么合成的引物做不加摸板的对照也能扩增出目的条带,而内参用同样体系就没有呢?是引物被污染还是引物设计不好导致的?

==========

引物被污染。
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挖挖挖[使用道具]
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发表于 2014-7-27 09:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教：我做的目的基因的Ct值总在38－39左右，有什么好办法降低它的Ct值？（模板DNA是用20ul水溶解的，每次用8ul左右，浓缩的方法好像行不通）

==========================

是否可以将扩增曲线贴上来看看
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seagate[使用道具]
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发表于 2014-7-27 09:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教：
实时定量PCR，荧光定量PCR，实时荧光定量PCR，real－time PCR，这些是不是同一个概念？

总是迷惑，多谢先！
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挖挖挖[使用道具]
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发表于 2014-7-27 09:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 seagate 于 2014-7-27 09:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

请教：
实时定量PCR，荧光定量PCR，实时荧光定量PCR，real－time PCR，这些是不是同一个概念？

总是迷惑，多谢先！

是一个意思。
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remonte[使用道具]
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发表于 2014-7-27 09:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
real－time PCR 即定量PCR？
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