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标题:【讨论帖】引物质量直接影响PCR结果!

yjf1026[使用道具]
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【讨论帖】引物质量直接影响PCR结果!

在此讨论我们实验室沉痛教训,以使大家借鉴。
在2006年7月至9月22期间,本实验室委托上海生工通过济南代理合成了十几对引物,期间,我们启用了10对引物。实验室伙伴们将目的基因扩增并链接T载体后,委托合成引物同一公司测序,结果发现,10对引物中有5对引物错误:
1:少了一个碱基
2:多了两个碱基
3:错了一个碱基
4:上游引物与下游引物合成的序列完全一致(给我们丢了下游引物)。
5:出现终止密码子一对
上述错误在10对中占有50%的比例,此错误比例惊人,给我们实验室造成严重损失,不仅仅剩余的几十对引物不再敢启用,更重要的是,这半年的工作白费,浪费了人力物力,更延误了我们与某公司签订的合同期。
我们已经与上海生工进行了联系,公司副总李瑞峰经理进行了查证,生工总经理王珞珈表示了道歉。
本科室发布通牒,以后不许在上海生工合成引物,不可靠的引物会对工作造成严重损失,时间是不可挽回的!!!
谨以上述实例提醒大家:当你的PCR做的结果不可思议时,请考虑引物问题。
cuturl('http://www.microbiology-sd.cn/')
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kuohao17[使用道具]
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恐怖阿,不像是聚合酶错配阿。
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leifengta[使用道具]
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可不是一般的恐怖啊,终于有人同情我了,呜呼,我们被上海生工合成的错误引物炸的休克了啊!连续5个啊~想:PCR扩增获得目的带、连接到T载体、再转化大肠、重复PCR鉴定、测序...多少工艺啊,多少劳动和汗水,全部损失掉~不休克才怪!
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fsdd817[使用道具]
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好像是生工的很多产品都不成熟!
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tangxin_80[使用道具]
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我有同感, 我合成的一对引物P不出条带,连非特异性都没有, 多谢提醒
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baidukk[使用道具]
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可能是搂主的运气差些吧。
我主要在上海生工合成引物,这三年总共有差不多1万个碱基吧,其中大部分是用来做全基因合成的,觉得错的不多。一般合成500bp的基因(共需要合成1000bp的引物)挑4个测序,有2个是完全正确的。
相反,我觉得上海生工的测序要差些。10个样品通常会有3个左右测不出来(之后同样的样品,同样的引物让广州英骏就测出来了)
总体来看,我还是比较信任生工的引物合成的,测序则首选英骏。
忘了说一下,生工引物合成有的在上海,有的在北京。应该是前者好些。
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caihong[使用道具]
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不争吵,在我发这个帖子之前,我已经跟你们生工副总李瑞峰交涉了,他对生工的错误进行了查证,总经理王珞珈进行了口头的道歉,并已通知财务取消所有您的余款挂账。
我们在生工的帐务很少,只是对损失的半年时间感到不平!我们有来往书信,你想读吗?Pathway


[ 本帖最后由 caihong 于 2014-7-29 15:12 编辑 ]
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yjf1026[使用道具]
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苦啊,连续5对引物啊,你想,从设计引物,等待你合成,然后PCR扩增、连接T载体、转化大肠、提取质粒、酶切鉴定、PCR...等,最后又测序,惨重啊!!!
根据Pathway所说,可能是测序出了问题,我非常希望是测序问题!但是,无论是那个问题,都不应该啊,造成的损失太惨重了,哭~~~~啊
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glass[使用道具]
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顶一下,我在生工订的引物都花了一周时间了,什么都扩不出来.连非特异条带都没有.晕,我已换了大概20多个条件,P了不下20管什么都出不来.但我的引物跑得出条带,不知道是什么原因?现在想换家公司重新合成,大家给推荐推荐啊!
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yonger[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 glass 于 2014-7-29 15:13 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
顶一下,我在生工订的引物都花了一周时间了,什么都扩不出来.连非特异条带都没有.晕,我已换了大概20多个条件,P了不下20管什么都出不来.但我的引物跑得出条带,不知道是什么原因?现在想换家公司重新合成,大家给推荐推荐啊! ...

我用大连宝生物的引物,以前都不错,但是这次定的引物两对,都没扩出来.不知道是不是也是引物合成的问题.
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