小中大【讨论帖】引物质量直接影响PCR结果!
在此讨论我们实验室沉痛教训,以使大家借鉴。
在2006年7月至9月22期间,本实验室委托上海生工通过济南代理合成了十几对引物,期间,我们启用了10对引物。实验室伙伴们将目的基因扩增并链接T载体后,委托合成引物同一公司测序,结果发现,10对引物中有5对引物错误:
1:少了一个碱基
2:多了两个碱基
3:错了一个碱基
4:上游引物与下游引物合成的序列完全一致(给我们丢了下游引物)。
5:出现终止密码子一对
上述错误在10对中占有50%的比例,此错误比例惊人,给我们实验室造成严重损失,不仅仅剩余的几十对引物不再敢启用,更重要的是,这半年的工作白费,浪费了人力物力,更延误了我们与某公司签订的合同期。
我们已经与上海生工进行了联系,公司副总李瑞峰经理进行了查证,生工总经理王珞珈表示了道歉。
本科室发布通牒,以后不许在上海生工合成引物,不可靠的引物会对工作造成严重损失,时间是不可挽回的!!!
谨以上述实例提醒大家:当你的PCR做的结果不可思议时,请考虑引物问题。
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