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再补上今天的实验结果吧，新配的Giemsa染液效果很好，见附图，实验目的也基本达到，很是开心。此外也补充一下这次摸索的心得吧：
1.关于Giemsa染液配制
Giemsa染色一定要新鲜配制的工作液，因为本人上午配制的工作液上午即时染色效果很好，到晚上做不同时段的染色效果明显降低。建议是Sorensen缓冲液：Giemsa原液9:1配制。
Sorensen缓冲液配制方法为1/15M Na2HPO4 + 1/15M KH2PO4，比例不同PH值不同，建议6:4或者5:5的比例，PH值大约为6.8-6.9，具体参照常用缓冲液的配制，网上一搜就有。
Giemsa原液的配制，我的经验（0.5gGiemsa粉末+22ml甘油+33ml纯甲醇）：取0.5gGiemsa粉末放在研钵里，加上甘油一起研磨，研磨一段时间后再加点甘油，直到混合液成糊状，不见颗粒，最后把总共的22ml甘油加进去搅匀，放在56℃烤箱2小时（注意：因为是烤箱，记得研钵用锡箔纸包裹以防蒸发），2小时后加入33ml纯甲醇，混匀后放在棕色瓶中4℃冰箱保存，可长期保存，网上不少资料建议保存至少一周后使用，我因为赶时间，保存3天就用了，效果如图。
2.关于固定染色步骤
温箱里取出transwell培养板后，先用预热37℃的PBS淋洗小室，别冲洗，这个时候可以先用棉签擦去上室未迁移的细胞（固定后擦除也可以，本人都试过了可行），然后在24孔板里每孔加入4%多聚甲醛约1ml，再放入小室，使小室滤膜浸泡在固定液里（这里也可以在小室内加入数滴固定液，记得避免下室有气泡存在），固定15-20min，取出小室，再次用PBS淋洗，放在桌台上风干，最后在孔板里加入新鲜配制的Giemsa工作液，每孔约800μl（以浸没小室滤膜下表面为度，小室内亦可滴入数滴染液），染色15-20min，蒸馏水冲洗，拭去小室滤膜内面多余染液，镜下观察计数。
先说这么多了，祝大家好运！！！
