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标题:【转帖】【求助】血管平滑肌细胞培养

tuomu45[使用道具]
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【转帖】【求助】血管平滑肌细胞培养


有那位作过血管平滑肌细胞培养的战友们,对于平滑肌细胞培养的体会和建议可以共享么?非常感谢!
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04906[使用道具]
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我做兔胸主动脉的,比大鼠和小鼠的好做的多!但应用受限!建议你选择人的!
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00无名指00[使用道具]
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我做过大鼠的,取其胸主动脉.
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我做过大鼠基底动脉平滑肌细胞的培养
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我用组织贴壁法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,今天是第三天,我忍不住拿出来看了一下,细胞没长出来,但是有很多亮晶晶的小圆点,放大以后仔细看,发现它好象在动.它们增殖得很慢,培养液没有变黄,也没变浑浊.我做之前所有器具都经过热压灭菌的.那些小圆点是细胞吗?Question
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kswl870[使用道具]
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平滑肌细胞是梭形或柳叶状,不会是小圆点
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pencil菲[使用道具]
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我帮师姐养过原代大鼠血管平滑肌,状态好的平滑肌看不清细胞轮廓,很饱满.但是状态不好的时候,边界就清晰了,可以看到成梭状,或者说拉网状.大鼠的血管平滑肌原代好培养一些,小鼠的一直没做出来.
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xueyouzhang[使用道具]
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具体的方法:(我曾经在硕士时养过二百瓶左右,有问题尽管问)
原代培养:
清洁级180-220g SD大鼠,断头处死,无菌操作取一段胸主动脉,洗去血液,去除外膜纤维脂肪组织,用眼科剪纵行剪开血管,刀片刮血管内膜2~3遍,然后将血管切成约1mm2大小碎片,分装贴入培养瓶中,加入含10%小牛血清的DMEM培养基,倒置3~4小时后翻转,于37% 5%CO2的细胞培养箱中静置3天(静置期间不许震动或移动培养瓶, 以防刚贴壁的组织细胞块脱落),然后每2天换液。一般4~7天左右平滑肌细胞从组织块中爬出,2~3周出现致密细胞层。 待细胞快融合时用0.25%胰蛋白酶消化传代,取3-8代细胞做实验。
细胞传代:
将原代细胞培养瓶中的培养液吸出, 加D-Hanks液到瓶中清洗细胞表面2次。弃掉清洗液, 加入0.25%胰蛋白酶1.0 ml, 将消化液均匀覆盖细胞表面,消化时间为2~4 min。这时在倒置显微镜下观察, 可见细胞成片皱缩变圆,细胞边缘折光增强。在细胞未脱落前倒去消化液,立即加入血清或含血清的培养基以终止消化。然后用滴管将细胞从培养瓶壁上轻轻反复吹打下来。然后根据细胞密度, 以1: 2~4分瓶培养。每2~3天换液, 待细胞生长到接近融合时(一般为7~10天)再传代。
注意要用Actin来鉴定一下,不然人家不信你的。
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zzzz[使用道具]
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我养的血管平滑肌细胞传代以后总是好几个细胞聚在一起,一团一团的,贴壁以后象一朵一朵的菊花.请教各位这是啥原因?怎样才能改善?
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koook5695[使用道具]
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细胞消化不充分,没有吹打成单细胞时会出现这种情况。
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