小中大接着谈下质量。
抗体作为四聚体糖蛋白,其生物学活性有赖于其完整的结构和恰当的翻译后修饰。某种角度上说,重组抗体的工艺优化,尤其是做similar,质量比TITER更为重要。
目前重组抗体的制备是采用动物细胞异源表达。其制备工艺中无论是克隆筛选、细胞培养还是纯化工艺都会都抗体的质量造成影响。克隆筛选的常用策略是根据蛋白表达量去挑选高表达克隆。这样就会造成表达水平高、但是存在质量变异的克隆会进入下一轮复筛。但是,在克隆筛选环节考察产物的质量,需要借助高通量的分析设备。细胞培养过程中无论是培养基、培养工艺(PH/DO/TIME),甚至搅拌桨的设计都会影响抗体的质量。另外,纯化、制剂过程中,涉及到的buffer条件不恰当也会造成蛋白聚体的产生。
目前重组抗体工艺开发中,经常关注的几个质量指标有
1、分子量,
2、纯度,即,单体、大分子物质(聚体)、小分量物质(降解)的含量
3、糖基化修饰(寡糖类型及分布,如GO/G1F/G2F/MAN5等
4、等电点。