【求助】能否从灭活的病毒疫苗中提取RNA或DNA，然后做PCR

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标题:【求助】能否从灭活的病毒疫苗中提取RNA或DNA，然后做PCR

XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-8-9 10:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我想从一种市售的RNA病毒的灭活疫苗中直接提取RNA，然后做逆转录PCR得到cDNA，不知道可行不？该病毒大小为7500bp，我所需要的结构蛋白为1600bp大小！恳请指点
另外，我不知道从科研院所好不好搞到这种病毒株（这是较常见的病毒株，但是对家畜兔感染），有没有相关的政策法规，需要提供什么样的证明材料，我只是用来做实验研究用！

Ao7[使用道具]
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发表于 2014-8-9 10:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不可行！核酸已经被破坏，等于是无法弃去到病毒的基因组模板。你要说出具体的病毒，有这种病毒的可以签协议赠送。

XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-8-9 10:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢版主！我刚毕业到地方高校工作，以前学分子免疫（但不是做疫苗），所以对疫苗还缺乏深入了解。现在我想根据当地的养兔多发病入手，目前初步选择了兔病毒性出血症（又叫兔温病毒，RHDV）来做疫苗研究。版主的建议很好，直接从灭活疫苗中扩基因是没有根据的，看来我只有两条路走了：1，从兔场采病料；2，从科研院所要，这个需要关系。第一条嘛就是不知道什么时候机会来了能采到，也有可能人家就不发病，这个兔瘟很厉害一旦发作死亡率极高；第二条嘛，就是楼主所说关系问题，本人初到没什么关系（至少现在没有）。
希望丁香园里的各位高人能予以帮助，不甚感激！

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发表于 2014-8-9 10:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 Ao7 于 2014-8-9 10:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不可行！核酸已经被破坏，等于是无法弃去到病毒的基因组模板。你要说出具体的病毒，有这种病毒的可以签协议赠送。

我需要的是兔瘟病毒RHDV，能提供帮助不；另外，签协议，我是想做疫苗，当然我也想做一些基础有意义的工作，这个会不会涉及到专利或利益关系。

XYZQ[使用道具]
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发表于 2014-8-9 10:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 kent 于 2014-8-9 10:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

兔病毒性出血热病毒是一种高度传染性的病毒（仅凭记忆），估计不能从国外购买或者远程邮递。如果你在哈尔滨，可以跟哈兽研的老师商量一下，他们有这种病毒。
你也可以以高校教师的名义跟国外的专家学者联系，如果能够得到全基因 ...

相关疾病：
腹泻

兔瘟目前不是我们这个片区兔场的主要高发病，不过因腹泻死亡的是常病而且高发，兔场老板问我们有没有可行的疫苗，我想能不能从死亡病兔中寻找病原并制备疫苗，不知道行否?

memory[使用道具]
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发表于 2014-8-9 10:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

从病死兔子中分离到病原体，但是不知道你病原体分离的技术和能力怎么样，毕竟这个要求很高，不仅能分离，还需要鉴别和认定，这是一整套的东西。
还有就是这个病原体，是否可以传染人，若有可能，且是高危险病原体，那么我建议你放弃，毕竟生物安全还是很重要的。
你的想法很好，但是离真正能够实现，还是有很长距离。不知道你自身的背景是什么，不知道你的实验室条件如何，这些都是否可以支持你在这个病原体分离，鉴定，研究方面一直走下去的资本和根本。而且，要想成功，也是需要一定的时间，而时间的计算单位是以年来计算。不知你是否有所考虑。

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发表于 2014-8-9 10:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位，你们提了很好的建议！你们提出的这些问题是研究中必须要考虑的，我们也建立了相关的实验规则加以解决。我们没有P3实验室，因此传染性、危险的病原我们不能做。刚建实验室没基础和经验，经过慎重考虑我放弃分离做病毒等病原。现在我们这边的养畜场发病的很多，我考虑从已明确病因的病料中直接抽取RNA或DNA，以及进行组织切片分析等，然后考虑做蛋白或DNA疫苗，可能比较可行，能不能出成果看运气了。

douding66[使用道具]
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发表于 2014-8-9 10:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

楼主可以找一下文献，看看全国做兔病的相关单位或课题组（其实兔子没几种病），据我个人所知，哈兽研、江苏省农科院做的还不错，不过大多数都在做疫苗，包括灭活苗、基因工程疫苗等，楼主如果也做这些的话估计很难达成协议，除非你自己有不同于别人的实验系统去做，否则设计专利或经济利益的话就很难办成了！其实现在很多都是灭活苗，自己建好检测方法，找到病兔，做自家苗效果还是不错的，只是国家不允许这么做，但是对于一些地方仍然在这么做。

douding66[使用道具]
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发表于 2014-8-9 10:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

兔瘟不需要P3实验室

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发表于 2014-8-9 10:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

目前我们已经从一个兔场的病料中分离到了一些细菌性病原，我们正在建立一个自己的养殖场，以便于实验需求，但是考虑到安全问题，我们一方面推迟了攻毒实验，另一方面加强了实验操作的安全和管理。。。。。。。等。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。、，。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。吗，，。、。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。、。，，‘’‘’‘，；。、。
我有我有一个问题就是，在一个兔场上分离到的病原，对其他兔场是否有普遍性；做出来的疫苗是否仅限于这个兔场

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