色谱爱好者之家

今天用梯度测定一个样品，主峰后面出现一堆杂峰，进溶剂也有，若用等度就没有，怪事，请大侠给支个招。
A：乙腈-水 5：95
B：乙腈-水 70：30
梯度 A
0 90%
6 70%
20 50%
30 70%
35 90%
45 90%

梯度变化的时候，出现杂峰是挺正常的，调整保留时间让样品峰避开吧

出现这种情况一般都是以下三个原因：

1.流动相污染：更换高纯流动相可解决。

2. 进样系统污染：请清洗六通阀，如果是手动进样，看看你的注射器是不是很脏。

3.色谱柱污染：好好冲冲柱子或者换一根干净的柱子以排除和解决此问题。

另外，你可以用你的梯度连续走几针空针，如果杂峰一针比一针少或成减小趋势，基本就是第2条或第3条原因，第3条原因的可能性更大;如果没有减少或减小就优先考虑你的流动相污染。

等度不出杂峰而梯度就出的情况很正常，优先考虑你的等度洗脱能力较差，可增大有机相比例冲洗。如果增大比例后仍是如此也属正常，因为流动相有可能将污染物均匀的冲出色谱柱，而且已经达到平衡，具体表现为噪音稍大但不会出鬼峰，这时就是发挥梯度洗脱作用的时刻了。当然，如果流动相本身污染这种情况更不足为奇了，梯度初始阶段洗脱能力弱，流动相里的污染物被吸附于色谱柱，随着洗脱能力增强，这些刚被吸附的污染物又被洗脱下来，于是出现了鬼峰。

我最近也有类似的问题，跑空针都有4~5个大的溶剂峰

最好找到原因居然是过滤流动相的滤膜的问题，不用滤膜就没溶剂峰

还有就是我的波长很低(215nm)，不知道你的是多少

由于水中或多或少都会有一些有机杂质,可能是ppm ppb级的

这些杂质一般来说极性比较弱

在恒流中不会有影响

但在梯度检验中

由于乙腈浓度比较低时这些杂质会有柱中聚集

而随着有机相乙腈的增加

杂质就会被洗脱下来

最有力的证据就是

当进样前待机时间越长

杂质峰越大

解决的办法

下策

用样品图谱减去空白图谱

中策

使用好的水或水相

例如用双蒸水代替纯化水

上策

使用同一根色谱柱处理流动相A

即水相

缺点是浪费时间

我们也遇到过，在排除了流动相质量问题后，查出来是液相管路里边有气泡，排气后就好了