色谱爱好者之家

使用前用甲醇冲过几个小时，流速在1ml/min，刚开始上的几个样，理论塔板数在4000左右，后来越来越低，3500，3000，2500，2000，直至降到 1100，现在还在用0.2ml/min的甲醇低速冲洗，已经快20个小时了，刚才上了个样，还是只有1136!怎么办啊?

难道是流动相把柱子毁坏了？你还是用标样测下柱效吧，不要用太极端的ph和温度

你的流动相是不是含水太高，看你的现象好像是输水塌方；
  用1ml/min甲醇或乙腈冲洗一段时间，可能能恢复；
  0.2ml/min流速太小了。

新柱子在使用前,首先使用乙腈或者甲醇活化，然后再选用的您要使用洗脱液进行平衡。在工厂，每根柱子都进行了老化。因此没有必要在第一次使用时用水冲洗。如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。

注意: 建议冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。

多谢2楼、3楼、4楼的，你们的建议对我非常有帮助

色谱柱的柱效影响因素很多，除了色谱柱本身质量和使用强度外，确与你使用时的色谱条件和分离样品有很大关系 。

除了按生产商给的条件检测外，如果没有太合适的条件(生产商用的样品各类一般挺多)，可采用比较常用的检测方法：一般是用苯、萘、联苯(甲苯)配制成含苯、萘、联苯各10μl/ml 的甲醇溶液(配制成一个溶液更好)，甲醇:水(85:15-80：20)，流量0.8-1.0ml/min，波长254nm(都可以微调).一般至少使用上面两个样品，试验一下。新的色谱柱应该很容易达到1W以上，一般在1.4-1.6W左右，好的到2W以上也不稀奇。

就你目前的情况来看，你已经做了一些样品了，那首先要把色谱柱处理一下。1.先根据你的样品情况将试验样品冲洗干净。2。遵循缓冲液-水-甲醇(乙腈)的原则将色谱柱冲洗到基本达到出厂状态。然后照上述方法检测一下。

如果还是柱效太低，趁还没怎么用，赶快退/换一根吧。Krosmail 的质量一般，应当在试验进行一两针发现不对立刻进行检测。希望还能给你换。

另，0.2的流速太低，你要是一开始为了把厂家留在里面的流动相冲出，还可以采用，但在后面处理色谱柱时还用这个流速，效率实在太低了，不妨加大一些流速(前提是要确保试验的样品都已经冲出了色谱柱)GOOD LUCK