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标题:【求助】 Q-PCR为什么actin熔解曲线出现两个峰？

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发表于 2014-8-27 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 Q-PCR为什么actin熔解曲线出现两个峰？

两个不同样本的beta-actin基因，熔解曲线出现两个峰，各自独立，位置不一样，这是什么原因哪？求解，谢谢！


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2014-8-27 10:42
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发表于 2014-8-27 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是正常现象啊 两个峰说明两组样品中目的基因的表达量不同
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发表于 2014-8-27 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 orangecake 于 2014-8-27 10:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
这是正常现象啊 两个峰说明两组样品中目的基因的表达量不同

同一基因的Tm值不是应该在同一个位置么？Tm值不同，不是说明PCR产物的GC含量不同么？
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发表于 2014-8-27 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很正常啊，一个可能是你做反转录时RNA本身不太一样，导致反转录出的cDNA总量也就不一样，另外一个是如2楼所言，不同样品中基因表达量不同导致的，
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发表于 2014-8-27 10:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 969 于 2014-8-27 10:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


同一基因的Tm值不是应该在同一个位置么？Tm值不同，不是说明PCR产物的GC含量不同么？

http://zhidao.baidu.com/link?url=S8z5wYjPqb7yPrrj67ichnQ_zQxaTSsMpwoyc5Lw8kAiEEWzADJWu1NabG2ze8bmCtqKSutbr98KwP7HMGvSKq
不好意思，刚才看错了，同一引物所用样品溶解曲线的峰是应该在同一温度的位置，我看了下自己real-time的溶解曲线，也是这样子的，只有偶然的一个样品峰的位置不对，具体原因我也不清楚了。准备把它抠掉。
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发表于 2014-8-27 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不同意楼上的观点的，同一个引物扩增同一物种的，他的溶解曲线中的Tm值的温度应该是一样的。你的两个不同样本的beta-actin基因是同一个引物吗？beta-actin基因是否特异性很强？荧光定量PCR对引物的要求很高。
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发表于 2014-8-27 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
需要深究么？只能测序吗？还是已有相关资料证明过这个问题？
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发表于 2014-8-27 10:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你说的两种样本是指两个物种么，是什么物种？
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发表于 2014-8-27 10:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2个峰应该是不同的产物，虽然同一个物种的样品，相同引物，有可能是不同的剪切体，位点突变，都可能造成TM值不同。
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mingming0638[使用道具]
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 小中大
熔解曲线不同，应该是扩增的产物不同
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