【讨论帖】RNAi及siRNA转染相关实验技术答疑

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标题:【讨论帖】RNAi及siRNA转染相关实验技术答疑

cocacola[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:42 资料个人空间短消息加为好友

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RNAi 是一种高效的特异性强的基因表达抑制，应用RNAi生物学机制进行基因功能研究已经成为一种创新性的新方法，人们第一次可以如此快速和方便地抑制细胞中特定基因的表达水平，从而用于分析特定基因在细胞中的功能。RNAi 技术还为新药开发、疾病治疗提供了创新性的方法和途径，有着极其广阔的应用前景。转染是RNAi技术应用的瓶颈。siRNA的转染是RNAi技术最常用和最重要的转染。由于siRNA转染技术应用的时间不长，对广大实验室和研究者来说还相对陌生，即使一些有经验的研究者也有一些疑问和困惑。

89tongzijun[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:42 资料个人空间短消息加为好友

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RNAi中，标准的非修饰的siRNA确实容易降解，这不仅在保存过程中，而且在转染过程中。

对siRNA的降解，可以合成修饰的双链siRNA，以提高合成中的稳定性，使用合成好的siRNA，尽量严格做到不要受RNA酶的污染。

对转染来说，因为要接触血清，培养基以及细胞内酶的作用。这时，好的转染试剂作用就显现出来了。要做到在血清中游离时，保护siRNA不受培养基中酶和蛋白的降解、吸附等影响，同时在进入细胞后不被溶酶体降解，并能释放到细胞质中。好的转染策略还不仅有保护的作用，更重要的是浓缩siRNA，不将细胞外的其他成分，特别是毒性成分，如抗生素、过多的蛋白带入细胞，以避免细胞产生毒性反应，毒性对RNAi实验来说，影响非常大。

ENA[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:43 资料个人空间短消息加为好友

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RNAi及siRNA转染相关技术资料内容介绍：

第一部分 RNAi实验基本概念
1.RNAi的概念
2.RNAi的启动途径
3.非哺乳动物系统的RNAi实验
4.哺乳动物系统的RNAi实验
5.RNAi效应表现

第二部分 RNAi实验具体设计
1.需要短期抑制还是长效抑制?
2.采用siRNA进行实验的途径
3.构建shRNA表达载体进行实验
4.siRNA设计需要注意的问题
5.脱靶效应

第三部分 siRNA转染过程相关问题及解答
1.siRNA转染过程相关问题
2.siRNA转染疑问解答

详细资料下载地址：
cuturl('http://www.engreen.com.cn/knowledge/RNAi&siRNAtransfection.htm')

PINK[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:43 资料个人空间短消息加为好友

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应用Entranster-R文献（不完全统计）

1.J Biol Chem. 2010 Apr 2;285(14):10890-901. Epub 2010 Jan 26.Xenopus skip modulates Wnt/beta-catenin signaling and functions in neural crest induction.

2.Apoptosis. 2010 Apr;15(4):488-98.A PKC-beta inhibitor protects against cardiac microvascular ischemia reperfusion injury in diabetic rats.