【求助】高保真酶扩不出条带

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标题:【求助】高保真酶扩不出条带

nikonun[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位老师您们好，请教一个很棘手的问题，为什么用普通的TAQ酶能跑出目的基因条带。换成高保真酶takara的Primer Max Star就跑不出来了呢？而且什么条带也没有？做过高保真梯度优化，模板浓度优化都不行。求指点？

glass[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

高保真的用过，不怎么稳定，批次间差异比较明显

mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我用高保真酶做重叠PCR，菌落鉴定是Taq酶，都有条带啊！注意PCR反应体系和PCR条件，不同的酶反应体系不一样，反应的条件也不一样！你最好看一下酶的说明书！上面有反应体系，也有需要设置的PCR条件！

nikonun[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 mamamiya 于 2014-8-27 15:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我用高保真酶做重叠PCR，菌落鉴定是Taq酶，都有条带啊！注意PCR反应体系和PCR条件，不同的酶反应体系不一样，反应的条件也不一样！你最好看一下酶的说明书！上面有反应体系，也有需要设置的PCR条件！
...

我严格按照说明书上面的来设置的反应程序，反应体系也是按照说明书来的，但是就是扩不出来！

hustwb[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

同的酶有不同的优点，个人感觉用PrimerStar从文库里P基因效果不错，但是以基因组为模板选用PS效果不佳。

flower@@[使用道具]
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发表于 2014-8-27 15:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一直用NEB的Q5，从来没出过问题~~~~

zhy平平[使用道具]
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