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标题:【求助】嵌套式PCR是不是就是巢式PCR?

ffaa[使用道具]
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【求助】嵌套式PCR是不是就是巢式PCR?

我是刚做分子实验的,看到有的文献上说的嵌套式pcr,是不是就是巢式PCR,还有为什么选巢式PCR,听说做的时候挺容易污染,请问做的时候应该注意什么?
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utt0989[使用道具]
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这个吧,我可以大体说一下。你说的嵌套PCR就是指巢式PCR,原理是这样的:指利用两套PCR引物(巢式引物)对进行两轮PCR扩增反应。 在第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增。 由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对PCR引物与检测模板的配对,增加了检测的可靠性。 步骤相当于多了一组PCR,如果有一旦污染的话,结果会被放大很多倍,所以说一旦污染就是失败了。有点有2个(个人理由)1. 很微量的模板,35循环下很微弱的条带可以尝试;2. 特异性不高的。回收条带做模板。
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baidukk[使用道具]
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谢谢,后面的“有点有2个(个人理由)1. 很微量的模板,35循环下很微弱的条带可以尝试;2. 特异性不高的。回收条带做模板。”没看太懂。我想用外引物PCR产物回收纯化再做内引物扩增,不知可不可以减少污染。
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gmjghh[使用道具]
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针对一次PCR产物量比较低的来做,我经常做病毒的扩增就是用巢式PCR。
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2541[使用道具]
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第二轮PCR的引物设计和第一轮的方法是不是差不多啊,不太会设计
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轰轰[使用道具]
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我想问下,什么PCR是用三个引物的?两个正向一个反向引物,跟巢式PCR有什么区别?谢谢
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yyaxw84[使用道具]
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谢谢!内外引物设计时有什么限制吗?初做实验不懂还请说明下
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mingming0638[使用道具]
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我想问下,什么PCR是用三个引物的?两个正向一个反向引物,跟巢式PCR有什么区别?谢谢

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你这个是双重PCR,跟巢式PCR不同
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3648755[使用道具]
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谢谢,我想咨询下,如果用第一次的特定引物PCR扩增完,琼脂片段回收后,以此为模板,再次用特定引物扩增后,再做DGGE,这个也叫巢式PCR吗?
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