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标题:【求助】做PCR实验时，反应液里的哪个东西最怕反复冻融？

newway[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】做PCR实验时，反应液里的哪个东西最怕反复冻融？


做pcr实验时，反应液里的哪个成分最怕反复冻融？是酶吗？
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是的 Taq 聚合酶 不易反复冻融 ，可以将除了酶之外成份配好4度保存即可，临用时再加入酶。
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ENA[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

酶保存在甘油里，不存在冻融的问题，只是酶操作要快，冰上操作，尽快放回冰箱，如果不注意酶活力下降。
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caihong[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

酶使用时最好也是保持低温，不要反复冻融，然后是dNTP
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zhenxin[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是各理论问题，在实际操作中，正常配制的工作浓度的溶液，这个问题，基本可以不用考虑。冻融的次数还不至于多到出现这个问题的时候，你的材料就已经被用完了。

看来，你们都还是纸上谈兵的秀才。
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jude[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可是我们实验中发现，Taq酶反复动融的话，PCR的效率降低
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greenbee[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢各位的解答！让我确认了心中的答案。因为每最后几次用所配试剂时，PCR效果就不佳，甚至胶上没有任何影像。

呵，我是初学者，以后还请大家多多指教。谢谢！
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室用的Taq酶都是自己制的，分装时都加了甘油，不存在反复冻融，10*buffer和dNTP也都是自己配的，平时我都是放在4℃，做的PCR结果非常漂亮
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wiwi[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我都把它放-20℃,只是除了酶之外，其它成份都混在一起存放。这样是否对其稳定性有影响？
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ALALA[使用道具]
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发表于 2014-8-27 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Taq酶本身在甘油中，只是希望你能最后加酶，这是一个习惯问题，只要快取快放，不会有什么问题，即使效率有所下降，也是有限的，建议将大管酶分装成小管，既方便又保险。
另外，如果是最后几次PCR结果不佳，我认为可能是从一开始，PCR体系中所用的药品，如buffer和dNTPs，都需要融化完全后取用，如果每次都不是融化完全就直接取，会造成管中各组分浓度发生变化，进而影响你的PCR体系。这是关键
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