小中大【求助】应用引物在序列中引入蛋白标签
打算应用引物在序列中引入蛋白标签flag，查到了大家的说法如下：
1. 酶切位点+5‘+ATG+FLAG+目的基因的CDS（目的基因的ATG可留可不留）+3’；只在上游引物的N端添加即可。
2. 我用的这个ATGGATTACAAGGATGACGACGATAAG
还没有分析蛋白结构所以我把上下游引物均进行了改造，我把我改造的放出来请大家帮我看看 ，我有没有理解正确：（引物中与目的基因匹配的用XXX替代）
A基因（上下游引物均起始与停止在起始子和终止子，也就是说直接在ORF两边加上了酶切位点，没有任何多余的碱基）
上游引物F ：CCC（保护碱基） AAGCTT（酶切位点） ATG(目的基因的起始密码子)XXX
修改后变成：上游引物F ：CCC（保护碱基） AAGCTT（酶切位点） ATG（用于起始标签）GATTACAAGGATGACGACGATAAG（标签序列） ATG(目的基因的起始密码子) XXX
下游引物：GC（保护碱基） GTCGAC（酶切位点） TCA（目的基因的终止密码子的反向互补）XXX
修改后变成： 下游引物：GC（保护碱基） GTCGAC（酶切位点）CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC（flag标签序列反向互补）CAT（起始密码子反向互补用于起始FLAG标签）TCA（目的基因的终止密码子的反向互补） XXX
B基因：（为了设计合适的引物在ORF前后均有一些多余的碱基）
上游引物F ：CCC（保护碱基） AAGCTT（酶切位点）XXX（此处起始碱基到目的基因的ATG碱基数为3的倍数）
修改后变成：上游引物F ：CCC（保护碱基） AAGCTT（酶切位点） ATG（用于起始标签）GATTACAAGGATGACGACGATAAG（标签序列）XXX（此处起始碱基到目的基因的ATG碱基数为3的倍数）
下游引物： GC（保护碱基） GTCGAC（酶切位点）XXX（此处终止碱基到终止子碱基数为19个）
修改后变成：下游引物： GC（保护碱基） GTCGAC（酶切位点）CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC（flag标签序列反向互补）CAT（起始密码子反向互补用于起始FLAG标签）GA(此两个碱基为随机加上的这样保证碱基数为21个)XXX（此处终止碱基到终止子碱基数为19个）
我已经尽力写清楚了，这两个基因囊括了在引物中引入标签序列的两大种情况，请大家费力帮我看一看，我有没有弄错，网上很多帖子说的都很不清楚，希望通过我的例子能让我也让大家弄清楚，谢谢
