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标题:【求助】 miRNA茎环引物做荧光定量PCR

ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-8-30 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 miRNA茎环引物做荧光定量PCR

最近做miRNA的荧光定量，老板想让用茎环引物去做，这方面不太了解，所以请高手指点一二，
1  茎环引物是不是用来做反转的，如果是那么用SYBR法做荧光定量时的引物怎么设计？
2  大家有这方面的资料的话发给我点看看，谢谢了
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2014-8-30 18:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

茎环引物是用来做反转的,而且如果是用颈环的方法，那么就应该用Taqman探针定量，而非荧光
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发表于 2014-8-30 18:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
茎环结构的引物是做逆转录用
定量的引物的话有两条，正向引物不一样，逆向引物是通用的
我也是刚开始接触这方面的，一起探讨吧
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yueban-1147[使用道具]
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 小中大
茎环引物是用来做反转的,而且如果是用颈环的方法，那么就应该用Taqman探针定量，而非荧光

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这个。。。有这种说法么？
请指教下
因为我师兄也是用茎环的引物，用sybr green做的
而且结果还不错。。。。
我正打算这么做呢
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-8-30 18:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那反转录完之后随机引物是怎么来的呢？茎环反转录出来的是pri-miRNA还是成熟miRNA啊？不懂，还请指点，谢谢
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ROSE李[使用道具]
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发表于 2014-8-30 18:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原来我也是这么认为的，后来才知道用染料法也可以做啊
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发表于 2014-8-30 18:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

染料法做没有问题的，效果很好。茎环引物反转出来的是成熟miRNA。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2014-8-30 18:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
茎环引物是用来做逆转录的，另外，我看到的国外文献都用的tagman探针。PCR的前后端引物，一个是特异性引物，另一个是互补于茎环的引物，引物设计也没啥，和普通的差不多，最主要是茎环与目标序列不要有错配，在前端引物的5‘端可能要加几个碱基，保证前后引物Tm值接近，这个引物设计过程是有点烦，需要摸索下。
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发表于 2014-8-30 18:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问能详细告诉一下颈环引物如何设计吗？不会设计引物。
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idea2011[使用道具]
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发表于 2014-8-30 18:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
茎环引物是用来做逆转录的，另外，我看到的国外文献都用的tagman探针。PCR的前后端引物，一个是特异性引物， ...

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你好，我是初学者，想请教下那个茎环引物的那个环怎么设计啊，有具体的例子，详细的步骤么，不胜感激啊！如果可以的话，我想加一下高手的QQ，请教下，谢谢啊
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