PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】求高人指点

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】求高人指点

mnstyle[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114513
精华 0
积分 188
帖子 116
信誉分 100
可用分 1341
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
1

发表于 2014-9-1 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】求高人指点


以rna为模板，以oligo反转录扩增一个1000bp的片段，扩actin可以扩出来，扩目的基因的一段也可以扩出来，但就是得不到全长，但以相同的引物从基因组扩增可以扩出来。求各位高人指点是什么原因.
顶部
dodoit[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114479
精华 1
积分 340
帖子 377
信誉分 101
可用分 2624
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
2

发表于 2014-9-1 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1. RNA丰度差异,actin丰都应该比你的目的基因高很多,所以RNA丰度相对高于目的基因,导致模板量高于目的基因,易于扩增.
2. RNA提取质量差，导致本来丰度不高的ＲＮＡ发生降解，断裂，从而扩增不出全长基因，而是部分基因．
顶部
eric930[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79368
精华 0
积分 722
帖子 1061
信誉分 101
可用分 6148
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
3

发表于 2014-9-1 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2楼说得对，还有一个可能原因: 你的目的基因可能有不同的Splicing Form，建议你去查查。
顶部
mnstyle[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114513
精华 0
积分 188
帖子 116
信誉分 100
可用分 1341
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
4

发表于 2014-9-1 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 eric930 于 2014-9-1 16:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

2楼说得对，还有一个可能原因: 你的目的基因可能有不同的Splicing Form，建议你去查查。

现在我也怀疑这个基因存在不同的Splicing Form，但是现在NCBI内没有注释，我想问一下怎么才能获得不同的剪接本？
顶部
TNT[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75639
精华 0
积分 455
帖子 610
信誉分 100
可用分 3826
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
5

发表于 2014-9-1 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

cuturl('www.ensembl.org')，选择“species”，输入基因名称， 在左边选择“restrict category of transcript”，点击第一条，下一页会显示所有“transcripts”. You may choose show transcript table and the id for each and sequences will be directly linked。
顶部
TNT[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75639
精华 0
积分 455
帖子 610
信誉分 100
可用分 3826
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
6

发表于 2014-9-1 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

cuturl('www.ensembl.org.')选择“species”，输入基因名， 在左边选择“restrict category of transcript”，点击第一条，下一页会显示所有transcripts. You may choose “show transcript table ”and the ID for each and sequences will be directly linked.一般最下面的是主要form.如果还有什么不清楚的
顶部
mnstyle[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114513
精华 0
积分 188
帖子 116
信誉分 100
可用分 1341
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
7

发表于 2014-9-1 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 TNT 于 2014-9-1 16:16 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

cuturl('www.ensembl.org.')选择“species”，输入基因名， 在左边选择“restrict category of transcript”，点击第一条，下一页会显示所有transcripts. You may choose “show transcript table ”and the ID for each and sequence ...

非常感谢，但是我的是植物大豆Glycine max，ensembl是不是只是动物数据库，想请问一下有没有植物的库可以查看剪切本
顶部