液相色谱

大家好，我做的是用异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法测试游离氨基酸含量。安捷伦1200，C18的柱子。
流动相A : 0. 1 mol/ L 醋酸钠缓冲液：乙腈(97 ∶3 , v∶v) 溶液;流动相
B :乙腈:水(4∶1 ,v∶v) 溶液
梯度。线性梯度洗脱程序: 0min ,0 % B ;11 min ,7 % B ;13. 9 min ,12 % B ;14 min ,
15 % B ;29 min ,34 % B ; 32 min ,70 % B ; 37 min ,0 %B ;47 min ,0 % B。流速1. 0 mL/ min。
柱温38度
现在问题是16种只分离出来13种，而且就前面几个分离效果还行，后面的峰很低很密集
希望大家指导一下，我还是新手

[ 本帖最后由 bobxiaomao 于 2010-12-6 09:02 编辑 ]

楼主，换极性大一些的柱子

楼主的问题到底是什么？是关于衍生还是液相色谱分析？

关于衍生：
氨基酸在弱碱性条件下与苯异硫氰酸酯生成相应的苯氨基硫甲酰衍生物，后者在硝基甲烷中与酸（如三氟乙酸）作用发生环化，生成相应的苯乙内酰硫脲衍生物（PTH-氨基酸）。具体做法参见下面资料（内容来自cuturl('http://www.dikma.com.cn/Library/index/id/325')）。



关于液相：
衍生产物具有紫外吸收，检测波长可用254nm。脂肪族氨基酸衍生物用C18柱分析肯定没问题，流动相配比问题可以先跑一个梯度予以尝试。酸性或碱性氨基酸在C18柱上保留可能会较小或者峰型不好，可以在流动相中加少量酸或碱予以调节。

楼主，你要衍生做吗？

你查一下国标。GB/5009 食品中氨基酸的测定，不过很麻烦，我也正在想办法改进测定条件。

是呀。请前辈多多指教

楼主连话都没说完啊，大家也不知道你要问什么，没办法帮你啊

氨基酸需要柱后衍生。

一般的测不到哦

您好。我想用异硫氰酸苯酯衍生法测鼠的一些组织和血液游离氨基酸含量。仪器是安捷伦1200，C18的柱子。主要想咨询一下样品前期处理，和衍生具体方案。。

这个麻烦

首先大鼠骨骼肌等组织要做处理  也就是平时所说地 样品的前处理  其次确定样品的紫外吸收最大波长  最后  找到合适的  流动相分离就可以了  我觉得最麻烦的  就是样品的前处理和 找合适的流动相了