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标题:【求助】我刚做pcr我的目的是鉴定菌种

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发表于 2014-9-21 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】我刚做pcr我的目的是鉴定菌种

我的marker 怎么一直跑不好啊？


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2014-9-21 15:27
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发表于 2014-9-21 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

恩，我这几天也在做菌种鉴定，刚开始第一次Marker跑的也不是很清楚，第二次我增加Marker 的量到8ul，基本上可以看清楚啦！要不你试试增加一下Marker的量试试看。
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发表于 2014-9-21 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胶配的有问题，或者缓冲液有问题
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发表于 2014-9-21 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

主要是电泳的电压低点，时间长点，还有配胶要均匀些。我们一般都120V,45min.胶浓度1%-2%
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发表于 2014-9-21 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的胶浓度是1%的 120V跑30min钟 小的条带就基本上跑过了 但是我现在的情况就是marker总是跑不好 marker 压根就跑不出清晰地条带 我用的不是EB 而是花青素染料 我的电泳液也都是新换的
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发表于 2014-9-21 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
marker 有没有坏掉啊。点个其他的marker比较下。电泳问题也就那几个，楼主慢慢排除。就只点marker一个个排除，当然首先要排除marker没问题。要么marker有问题？要么胶不好？要么电泳液有问题，新得电泳液是不是配错了？我一般2000bp片段，150v，20W，15分钟就可以看了。
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发表于 2014-9-21 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做的胶是不是太薄了？太薄了有时候也跑不好，电泳液要漫过胶表面啊。
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发表于 2014-9-21 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
胶要化的均匀，多试几次
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发表于 2014-9-21 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得你的电压问题，最右边的条带也是很明显的。
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ALALA[使用道具]
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发表于 2014-9-21 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好像是胶不均匀，找有经验的老师请教下配胶的技巧吧。
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