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标题:【求助】PCR 胶孔很亮

ssonglikihi[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR 胶孔很亮


琼脂糖凝胶电泳时，mark，阳性对照，阴性对照都是正常的 但是样品的条带的上样孔很亮，而且目的条带也变淡了很多  是怎么回事啊？
由于RNA模板放-70存放了2个多月，然后进行反转录和pcr,刚提的时候跑电泳孔不会亮，会不会是RNA降解了啊？谢谢大侠支教啊
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wiwi[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

第一，你的RNA降解了，所以目的条带不亮，当然有可能是跑胶时降解的，本身还没降解。
第二，孔里的亮是由于你保存RNA时加的RNase抑制子等蛋白。
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发表于 2014-9-24 10:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做个新胶，换新缓冲液，再试试。看看到底降解在何时。
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nut6694[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
孔里亮是因为有蛋白，残留在孔里所以会亮。你的目的条带不亮可能是胶的问题，也可能是你的RNA降解了，不过降解的可能性很小啊。
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ssonglikihi[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 wiwi 于 2014-9-24 10:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

第一，你的RNA降解了，所以目的条带不亮，当然有可能是跑胶时降解的，本身还没降解。
第二，孔里的亮是由于你保存RNA时加的RNase抑制子等蛋白。

恩 有道理 你说该怎么去除呢 ，离心后孔还是很亮哦 我是用qiagen试剂盒提的RNA
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ssonglikihi[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 nut6694 于 2014-9-24 10:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
孔里亮是因为有蛋白，残留在孔里所以会亮。你的目的条带不亮可能是胶的问题，也可能是你的RNA降解了，不过降解的可能性很小啊。

我的目的条带是100bp的，所以配了3%的胶，胶需要改进么。刚提的rna跑电泳的时候孔都不会亮的
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ssonglikihi[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 nut6694 于 2014-9-24 10:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
孔里亮是因为有蛋白，残留在孔里所以会亮。你的目的条带不亮可能是胶的问题，也可能是你的RNA降解了，不过降解的可能性很小啊。

做了新胶还是一样哦
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feima+[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问下，孔很亮，是因为蛋白质的污染，这些蛋白质是因为分子量太大跑不动，还是什么其他原因啊？
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ALALA[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

DBI Bioscience的PCR mix 电泳实验无须添加电泳上样缓冲液，红色和黄色双色染料更加精确的指示电泳位置。
还可以免费设计引物，提供技术咨询。
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