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标题:【求助】 real-time PCR 怎样计算基因拷贝数

gmjghh[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 real-time PCR 怎样计算基因拷贝数


我做的是Real-Time pcr敏感性试验，做到10的-7次方，在这个稀释度下，我怎么计算基因的拷贝数呢？？求教啊，我在网上查的要知道原基因的碱基数，我都糊涂了
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viviwang1987[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对啊 你要先做标准品， 标准品基因的碱基数是知道的，根据公式就可以算出拷贝数，以此做标准曲线，检测你目的基因的拷贝数！
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问建了标准曲线的都是绝对定量吗？绝对定量和相对定量的区别是哪些？谢谢！
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junhun[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
建立的标准曲线  也要做内参的， 双标准曲线的绝对定量 这样做出的拷贝数或者表达量更准 。
而相对定量只是跟保守的内参基因比较， 检测目的基因的相对表达量， 不能检测拷贝数！
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 junhun 于 2014-9-24 10:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
建立的标准曲线  也要做内参的， 双标准曲线的绝对定量 这样做出的拷贝数或者表达量更准 。
而相对定量只是跟保守的内参基因比较， 检测目的基因的相对表达量， 不能检测拷贝数！
...

我的qPCR实际上没有做定量，也没有做标准曲线，现在我利用阳性对照做cutoff值，稀释了10^6，那这样P出来，该怎么计算模板的拷贝数呢？谢谢了
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pulala[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那你阳性对照的模板是什么？ 基因组吗？ 基因组的话就不好算啦！
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 pulala 于 2014-9-24 10:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
那你阳性对照的模板是什么？ 基因组吗？ 基因组的话就不好算啦！

嗯，是基因组，不是质粒呢，后来我做标准曲线，根据公式也只能算出浓度啊，不知道拷贝数怎么算了
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-9-24 10:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有没什么网站可以直接计算DNA拷贝数的呢？
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