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标题:【求助】LBA4404农杆菌到底长什么样子啊？

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发表于 2014-9-24 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】LBA4404农杆菌到底长什么样子啊？

在做完表达载体PBI121-基因后，转化到lba4404农杆菌中，涂板长的菌特别白，但菌落pcr和提取质粒没结果，这些白色的菌落是什么，那么LBA4404农杆菌应该是长什么样子的？请高手指点！！！！


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发表于 2014-9-24 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

LBA4404的菌落基本上就是乳白色的，但不是很白的那种，看你这菌的样子好像是，不像是杂菌，你抗生素应该加了吧。PCR的话引物有没有问题呢？退火温度？P不出来的原因太多了。。。
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发表于 2014-9-24 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在做了很多次都是这种白色菌落,引物应该没问题.有的时候菌落pcr能出来，但是同时保存的菌落再次进行PCR时，又没有了，这是怎么回事呢？请指教，谢谢！！！
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发表于 2014-9-24 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

抗生素加的是利福平和卡那霉素。
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发表于 2014-9-24 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能培养条件不太好，菌长得不好。  抗生素量要调对
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发表于 2014-9-24 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想问这白色的菌落到底是不是lba4404的样子啊。另外菌长的不好，是什么意思，4404难道不是这个样子？我不是太明白，请指教。谢谢各位啦！！
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发表于 2014-9-24 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
抗生素加的是利福平和卡那霉素。

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这个菌落应该是了，利福平我平常做都是加25mg/L，卡那是50mg/L，既然排除了引物问题，那你配PCR体系的时候有没有等PCR试剂完全溶解再配呢？有时溶解不完全也有可能p不出来，还有就是PCR仪的单个小孔有时也会有问题，不过这个好解决，多做个重复基本就行了。你用保存的菌落是直接做还是再挑单菌落划板做？直接做的有可能存放时间比较长，可能质粒降解了啊，或者是有其他代谢产物影响，都会p不出来的
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发表于 2014-9-24 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先非常感谢2楼楼主，谢谢您认真仔细的讲解，再次感谢！！！保存的菌落放了3-5天，PCR体系一样，保存的菌落是直接做的，没出来。请问，如果再挑单菌落划板做，PCR出条带的概率会高吗？如果对PCR有条带的菌落进行摇菌用40%甘油保存后的菌液，再进行增殖培养的话，是不是也的对保存的菌液再次划线培养、摇菌呢？
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发表于 2014-9-24 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先非常感谢2楼楼主，谢谢您认真仔细的讲解，再次感谢！！！保存的菌落放了3-5天，PCR体系一样，保存的菌落 ...

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客气客气，互相探讨嘛。放了3-5天有点久了，你就再挑单菌落画板，挑新板上长出来单菌落去做PCR，一般引物，退火温度，PCR体系没问题，菌落PCR都能做出来的。如果你把菌冷冻保存了，再次使用的时候建议你最好活化一下，可以先摇，摇的话菌比较好长，再画板，最重要的一点是，每次培养基不管是固体还是液体都要加抗生素就对了。。。祝你实验成功
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发表于 2014-9-24 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在正在涂板，再次试验啊。谢谢啊！！！
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