【求助】pcr 阴性对照出现条带，怎么办？

PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】pcr 阴性对照出现条带，怎么办？

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】pcr 阴性对照出现条带，怎么办？

yjf1026[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76421
精华 1
积分 497
帖子 670
信誉分 102
可用分 4116
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态离线

发表于 2014-10-7 10:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我前几天做pcr突然就p不出来了，今天重做的时候把新旧两管taq酶都拿来做pcr。结果发现旧的酶pcr后没有条带，新的有条带，但是阴性对照也出现条带了。想知道怎么处理。以前p的条带在780bp，现在的估计710bp。pcr的条件都没有变

附件

2014-10-7 10:08

00.jpg (78.5 KB)

IAM007[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 75217
精华 0
积分 464
帖子 608
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态离线

发表于 2014-10-7 10:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你用的什么染色剂，红色的。
阴性对照是指不加模板吗？只加引物，酶等？

yjf1026[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76421
精华 1
积分 497
帖子 670
信誉分 102
可用分 4116
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态离线

发表于 2014-10-7 10:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #2 IAM007 的帖子

用 EB染色，我用数码拍的
对，阴性对照就是什么都有，除了模板外。所以，出现假阳性结果，想请假一下。

rxcc33[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79965
精华 0
积分 633
帖子 885
信誉分 100
可用分 5303
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态离线

发表于 2014-10-7 10:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议你做好各种防污染的措施。1、所用的PCR管一定要高温灭过菌的，2、一定要带上手套，防止人体DNA污染，3、将primer mix 等先混好，再分装加模板，在混的过程中尽量不要说话，也是防止人体DNA的污染，4、再有就是自己想一想还有哪些地方可能会污染上其他物种（特别是人的）DNA，然后采取措施隔离

yjf1026[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76421
精华 1
积分 497
帖子 670
信誉分 102
可用分 4116
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态离线

发表于 2014-10-7 10:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的条件什么都没变，昨晚把pcr仪器的样品孔都清洗了，但是今天做还是有污染。楼上所说的我一直都是这么做的呀。

ALALA[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 77477
精华 0
积分 671
帖子 1002
信誉分 100
可用分 5901
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2014-10-7 10:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

哎，我和你的问题一样，阴性对照有带，把药品换了还是不行，就才差引物了，不行只能重新合成

红袖添香[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 107969
精华 0
积分 153
帖子 66
信誉分 100
可用分 1036
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态离线