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标题:【求助】细胞生物学实验的镜检标本制备必须取材新鲜...

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【求助】细胞生物学实验的镜检标本制备必须取材新鲜...

细胞生物学实验的镜检标本制备必须取材新鲜且迅速固定,为什么?透射电镜观察的样品为什么必须事前进行脱水处理?
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nn255[使用道具]
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不光是细胞生物学,绝大多数生物学研究都需要尽快制备标本,以免细胞结构或成分发生变化。
不光是透射电镜样品需要脱水,石蜡切片也是一样的,否则无法包埋和切片,因为包埋剂一般是脂溶性的,只不过石蜡切片用石蜡包埋,电镜标本用树脂包埋。
扫描电镜样品也通常要进行脱水处理,否则无法镀膜,而且会变形。

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QUOTE:
原帖由 nn255 于 2014-10-10 16:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不光是细胞生物学,绝大多数生物学研究都需要尽快制备标本,以免细胞结构或成分发生变化。
不光是透射电镜样品需要脱水,石蜡切片也是一样的,否则无法包埋和切片,因为包埋剂一般是脂溶性的,只不过石蜡切片用石蜡包埋,电镜标本 ...

问题是为什么要这样做呢?谢谢
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ladyhuahua[使用道具]
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细胞生物学实验的镜检标本制备必须取材新鲜且迅速固定
还有酶的原因。
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这个是考研真题,系统的回答应该答上哪些要点呢?
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ladyhuahua[使用道具]
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我不是已经告诉你了?
再详细一点,电镜标本的制作过程是这样的:
戊二醛固定——PBS冲洗——锇酸固定——PBS冲洗——丙酮逐级脱水——树脂(如EPON812)+丙酮渗透——纯树脂渗透——包埋——聚合——修块——超薄切片——柠檬酸铅和醋酸双氧铀染色——电镜观察。
经历了由水相——油相——水相的过程,不脱水行吗?要善于思考,不要善于记忆知识点!!!
石蜡切片和这个过程大同小异。
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回复 #6 ladyhuahua 的帖子

这个问题我问过我们老师了,老师的回答是这样的:
因为离体的细胞处在很低的大气压中,膜结构很不稳定,时间长了之后会导致膜结构破坏,整个细胞就支离破碎了。
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ladyhuahua[使用道具]
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你们老师的答案可能不正确,那离体培养的细胞就活不成了?
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您所说的离体的细胞也是要有环境的吧,什么培养液之类的东西应该是要的吧,但是要镜检的话,在载玻片这些条件都是不存在的啊,所以要迅速固定啊!
您说呢?
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ladyhuahua[使用道具]
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正是因为细胞离体之后,失去了原来的生存环境(譬如能量得不到补充等),结构和成分会发生变化,甚至死亡破裂。
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