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标题:[未解决]请教关于酶活力测定过程中加福林试剂后出现沉淀问题

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南台山下[使用道具]
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请教关于酶活力测定过程中加福林试剂后出现沉淀问题

在用福林法测定酱油大曲酶活力过程中,在最后一步加入福林试剂后出现白色沉淀,这白色沉淀能自动慢慢沉淀下来。那位高手能指点一下这是那方面出现问题?
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anxt2006[使用道具]
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坛友,我先请教你几个问题啊!
首先酱油曲中的酶你是怎么提取出来的
其次你的福林酚试剂是自己搞的,还是买来的商品,浓度如何
第三你是严格按照测蛋白酶酶活的步骤做的?用TCA失活酶活力了吧,然后过滤,上清液加福林酚后出现沉淀的?
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  • miracle   2010-11-12 11:54  可用分  +3   欢迎参与技术讨论!
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回复 #2 anxt2006 的帖子

先谢谢这位坛友的关心!
我是按照ZBX66030蛋白酶活力测定法来测定的。
1.酶提取是将大曲磨碎加水后在40度水浴1小时提取的,用0.1mol的pH7.2的磷酸盐缓冲液稀释的。
2.福林酚试剂是自己搞的,按照ZBX66030来配制。是在6月份配制的,用了差不多5个月了。
3.出现这个问题是上星期五开始的。之前都没事的。是过滤后的上清液加福林酚后出现沉淀的。
我现在将TCA溶液、碳酸钠溶液、酪蛋白溶液都重新配制过。但还是有沉淀。现在想重新配过福林酚试剂看看怎样?

[ 本帖最后由 南台山下 于 2010-11-12 11:59 编辑 ]
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回复 #3 南台山下 的帖子

恩,我估计是福林酚试剂的问题
我做这个酶活实验,福林酚一般都是买的试剂
然后稀释一下
你重新配一下试试看吧!欢迎常来论坛,大家一起交流学习。
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smmdcryctc[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 南台山下 于 2010-11-12 11:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
先谢谢这位坛友的关心!
我是按照ZBX66030蛋白酶活力测定法来测定的。
1.酶提取是将大曲磨碎加水后在40度水浴1小时提取的,用0.1mol的pH7.2的磷酸盐缓冲液稀释的。
2.福林酚试剂是自己搞的,按照ZBX66030来配制。是在6月份 ...

你的Folin-酚乙液的标定是怎么标定的啊?能否告知,谢谢!
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回复 #4 anxt2006 的帖子

好的,谢谢啦!
希望是福林酚试剂问题。
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回复 #5 smmdcryctc 的帖子

呵呵!不好意思,我这里用的福林酚试剂是不用标定的。我也没标定过。
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问题总算解决了。是福林酚试剂出了问题。从新换了之后现在正常检测了。
但是具体原因可不清楚了
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回复 #5 smmdcryctc 的帖子

不好请问坛友所说的标定是指标定其浓度还是测定其K值。不知浓度和K值是否一样的。我这里不测定浓度,只测定K值,是按照专业标准来测定的。
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anxt2006[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 南台山下 于 2010-11-15 10:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
问题总算解决了。是福林酚试剂出了问题。从新换了之后现在正常检测了。
但是具体原因可不清楚了

呵呵,那就好了
福林酚试剂是有使用期限的吧
还有与保存条件有关系
呵呵
以后注意及时更新试剂啊
配置时一定标准好时间哦
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